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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】离子交换层析怎么选择pH?
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quinn

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】离子交换层析怎么选择pH? 已有3人参与

我在做蛋白质纯化，用的是DEAE-A50，请教各位，如何选择缓冲液pH啊？照书上说的用试管做了不同pH的预实验，从3.6到6.0可是结果都差不多，酶都能挂到胶上，用盐也能洗下来，并且除了6.0，其它pH的上清，也就是没有挂到胶上的还有大部分蛋白，可用考马斯亮蓝测出来，6.0上清几乎没有蛋白，也就是全挂到胶上了。
    所以我选了5.4试一下，发现结果和预实验很不一样，用缓冲液洗的时候根本没有蛋白下来，用盐洗又有好多连峰，分不开，然后我又试了一下4.0，结果根本分不开，梯度洗得时候就一个峰，不过峰很漂亮
。
    亲们，给点意见吧！
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古之成大事者，不惟有超士之才，亦有坚忍不拔之志
1楼 2010-11-15 14:32:25
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wolfrog

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-11-15 23:16:28
啊……你的目的就是把不同蛋白分开啊……要不要换个强一点的Q试试，或者分子量相差很大的可以用分子筛？
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4楼2010-11-15 22:58:59
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wolfrog

金虫 (小有名气)
目的蛋白pI多少？
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2楼2010-11-15 22:34:43
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quinn

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wolfrog at 2010-11-15 22:34:43:
目的蛋白pI多少？

我分的是自己发酵培养的，怎么知道pI 呢，分出来才能知道啊
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古之成大事者，不惟有超士之才，亦有坚忍不拔之志
3楼2010-11-15 22:48:36
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小小鱼7775

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
最近也在为这个烦恼
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-10-15 13:26:33
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