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quinn

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】离子交换层析怎么选择pH? 已有3人参与

我在做蛋白质纯化,用的是DEAE-A50,请教各位,如何选择缓冲液pH啊?照书上说的用试管做了不同pH的预实验,从3.6到6.0可是结果都差不多,酶都能挂到胶上,用盐也能洗下来,并且除了6.0,其它pH的上清,也就是没有挂到胶上的还有大部分蛋白,可用考马斯亮蓝测出来,6.0上清几乎没有蛋白,也就是全挂到胶上了。
    所以我选了5.4试一下,发现结果和预实验很不一样,用缓冲液洗的时候根本没有蛋白下来,用盐洗又有好多连峰,分不开,然后我又试了一下4.0,结果根本分不开,梯度洗得时候就一个峰,不过峰很漂亮

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古之成大事者,不惟有超士之才,亦有坚忍不拔之志
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quinn

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by wolfrog at 2010-11-15 22:34:43:
目的蛋白pI多少?

我分的是自己发酵培养的,怎么知道pI 呢,分出来才能知道啊
古之成大事者,不惟有超士之才,亦有坚忍不拔之志
3楼2010-11-15 22:48:36
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wolfrog

金虫 (小有名气)

目的蛋白pI多少?
2楼2010-11-15 22:34:43
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wolfrog

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-11-15 23:16:28
啊……你的目的就是把不同蛋白分开啊……要不要换个强一点的Q试试,或者分子量相差很大的可以用分子筛?
4楼2010-11-15 22:58:59
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小小鱼7775

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
最近也在为这个烦恼
5楼2011-10-15 13:26:33
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