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飘在海上的雪

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[交流] 【求助/交流】PCR产物直接测序，怎么找不到引物？已有7人参与

我测了几组PCR产物序列，得到的比实际的少不少bp，找不到引物，怎么回事？

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不在沉默中爆发，就在沉默着死亡！

1楼 2010-11-04 21:57:16

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yixuanwin

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又不是克隆测序，怎么可能找到引物。

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2楼2010-11-04 22:55:27

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段家一凡

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要看你片段大小，小于一个测序反应的最高限的长度，还可以看到另一端的引物序列，如果太长（大于1K），就不可能了。

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3楼2010-11-05 00:25:30

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hkfgwww

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如果是通用引物（根据载体设计）测序，可以看到自己设计的引物序列（根据目的基因设计）。如果使用的是自己设计的引物序列（根据目的基因设计），自然看不到引物序列了。
测序的原理是引物下一个碱基开始测定。

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微生物发酵

4楼2010-11-05 02:13:25

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guixiaohua

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5楼2010-11-05 11:49:24

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5楼的朋友说的对，刚开始一小段序列是测不出来的，可以说是乱测，而你的引物就在这里，自然也找不到了

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6楼2010-11-05 14:55:43

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jhu132llh

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直接测序嘛，
给测序公司忙去呗

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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！

7楼2010-11-05 18:14:09

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引用回帖:

Originally posted by guixiaohua at 2010-11-05 11:49:24:
问题很简单啊，测序有30-40左右不准，PCR产物去测序，你引物刚好在这个区域，就没有你的引物啊，你要是连接其他载体上，再利用通用引物去测，就会有你的引物序列了。

说得对

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8楼2010-11-05 20:36:11

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段家一凡

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5,6,8楼说法是错误的，看看4楼的说法，PCR产物直接测序是从引物后的第一个碱基开始的，然后引物后的前30个碱基是测不准的，所以你是不可能看到你的测序引物的。但如果你的片段比较短的话，小于500bp，那么应该可以看到另一头的引物。

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9楼2010-11-06 00:14:02

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段家一凡

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引用回帖:

错误的理解，不是不准，是引物序列本来就是测序引物，根本就没测。

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10楼2010-11-06 00:16:16

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