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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物直接测序，怎么找不到引物？
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飘在海上的雪

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR产物直接测序，怎么找不到引物？已有7人参与

我测了几组PCR产物序列，得到的比实际的少不少bp，找不到引物，怎么回事？
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不在沉默中爆发，就在沉默着死亡！
1楼2010-11-04 21:57:16
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段家一凡

木虫 (正式写手)
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dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-05 08:40:39
要看你片段大小，小于一个测序反应的最高限的长度，还可以看到另一端的引物序列，如果太长（大于1K），就不可能了。
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3楼2010-11-05 00:25:30
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段家一凡

木虫 (正式写手)
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dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-06 09:37:54
5,6,8楼说法是错误的，看看4楼的说法，PCR产物直接测序是从引物后的第一个碱基开始的，然后引物后的前30个碱基是测不准的，所以你是不可能看到你的测序引物的。但如果你的片段比较短的话，小于500bp，那么应该可以看到另一头的引物。
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9楼2010-11-06 00:14:02
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段家一凡

木虫 (正式写手)
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引用回帖:
Originally posted by guixiaohua at 2010-11-05 11:49:24:
问题很简单啊，测序有30-40左右不准，PCR产物去测序，你引物刚好在这个区域，就没有你的引物啊，你要是连接其他载体上，再利用通用引物去测，就会有你的引物序列了。

错误的理解，不是不准，是引物序列本来就是测序引物，根本就没测。
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10楼2010-11-06 00:16:16
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