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D调华丽

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】(引物设计)怎么防止pET28a中Nco1的ATG影响目的基因的表达? 已有1人参与

我想在目的基因上游加NcoI酶切位点(C/CATGG),把目的基因连到pET28a上。
因为目的基因自身也有ATG,而用NcoI酶切后与pET28a连接上后NcoI也会剩一个ATG,所以目的基因前面也有个ATG了, 翻译应该是从NcoI酶切剩下的ATG开始的吧,
如果在目的基因上ATG翻译之前,先终止一次的话,后面的目的基因还可以继续翻译吗?
或者还有其他方法 让pET28a中Nco1酶切后剩的ATG不影响目的基因的表达?
请相关人才指点一下哈!
谢谢!

[ Last edited by D调华丽 on 2010-10-31 at 14:06 ]
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dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
wanhscn(金币+2): 鼓励交流! 2011-12-27 20:21:07
就算基因内部有ATG,基本上还是从NcoI上的ATG开始翻译的,因为它离T7 promoter和RBS位点比较近,翻译几率大很多。
10楼2011-12-27 20:00:33
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