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tian1203

银虫 (著名写手)

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[交流] 【求助/交流】双酶切求助

用fermentas公司的Kpn1和Xho1双酶切Pmd-t18simple上的目的片段
只是普通酶，没有通用Buffer，所以分步酶切
第一步：
                  2ul    10X TangoBuffer
                  2ul       Kpn1
                  10ul    质粒
                  6ul       ddH2O
         37度5h

第二步：
               6ul    10X TangoBuffer
               2ul       Xho1
               12ul    ddH2O
         37度5h

出现的问题：2个月前可以切下550bp的片段
                  现在相同的方法350bp，550bp,900bp,1200bp,1700bp却啥也且不下来。请求帮助
               根据fermentas公司的建议方法也没切下来。

小弟实验新手，恳求各位帮助，或者关于双酶切的任何建议
不胜感激！

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