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pumpkin236铁虫 (小有名气)
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[交流]
【求助/交流】关于MTT的一些疑惑
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最近重复做了两次MTT加药实验，效果都不好。有几点疑问想请教一下 1由于酶标仪坏了，用的是24孔板，用紫外分光光度计测得。细胞总是接种不均匀，不知道大家接种的密度怎么把握？我是先加少量的细胞悬液于孔板中，然后补加完全培养基至1毫升。但是第二天还是发现长的不均匀，有些地方很稀，有些又快接触抑制了，不知道有什么好方法可以让长的均匀些 2对于血清的影响有点疑惑。实验室传统做法是，前一天接种，第二天早上换无血清培养基，说什么同步化，（同步化是虾米意思），12小时后含药物的无血清培养基，然后24小时后做MTT。由于我的细胞是2nih3t3，用无血清培养基培养后很快萎靡了，然后死了。所以在上述步骤中换成了5%血清的培养基。但是又有师姐说血清对实验结果影响很大。我很纳闷，因为家DMSO之前，含血清的培养基已经吸走后才加的DMSO溶解，残留不多，应该影响不大啊。求教啊 3还有就是关于染菌问题。上次做过一次，发现以前没有发现的问题，加MTT前发现有漂浮物，而且貌似有很多细胞已经不是以前的形状，貌似是萎靡或死了。加MTT死小时后，漂浮物竟然染色了，有紫色的晶体。我一直以为漂浮物是死细胞，难道是细菌么？ 问题有点多，希望哪位有经验的好心人细心解答下。。。。 |
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