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【求助/交流】请教PCR条件优化
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以真菌基因组为模板PCR基因，得到的目的带很弱，请教如何优化PCR条件 目的片段为1141bp， 第一次PCR电泳图请见图1  真菌A的基因组作为模板 1~6，7~12为不同的引物，分别为引物对m和引物对n（引物对m和引物对n的3‘端一样，5’有不同的酶切位点和保护碱基） 1~3 基因组模板未稀释，1~3，退火温度分别为47,49,50 4~6基因组模板稀释10* ，4~6退火温度分别为47,49,50 分析发现，模板不稀释，PCR产物较浓，模板稀释10倍，影响不大，退火温度高时，PCR产物产量较小。 第二次PCR电泳图请见图2  真菌A和B的基因组作为模板 引物为n 1，2 分别为B菌种基因组稀释10*，100*，作为模板 3~6为菌种A 基因组为模板 3,4为基因组10*稀释，分别为退火温度50, 52 5,6为基因组100倍稀释，分别为退火温度50, 52 结论：1,100*稀释PCR产物太淡 2,52℃退火比50℃退火杂带少 |
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amilie030312
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7楼2010-10-18 09:47:16