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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何检测cDNA的质量
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linjl010

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】如何检测cDNA的质量

请问如何检测cDNA的质量，其中mRNA序列大约3000bp。另外，合成cDNA实验中应该注意什么？
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1楼 2010-10-11 10:08:25
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-11 17:08:03
linjl010(金币+2): 2010-10-12 08:53:19
cDNA量少，直接跑看不出来什么，即使有弥散也不能说明质量好坏。

纯度的话用跨内含子的housekeeping基因引物P，看产物大小，避免有基因组残余。有符合要求的目的基因的引物更好了，但是表达量少的话容易P不出来

反转要成功，首先RNA要好，操作要小心，RNasin要加，dNTP要新的（至少也是RT专用的）。热变性要充分
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4楼2010-10-11 16:29:43
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
★
dhd997(金币+1):很活跃，鼓励交流。 2010-10-11 10:24:58
linjl010(金币+1): 2010-10-12 08:51:26
最好是用PCR来检测了，因为跑胶跑不出来的。
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2楼2010-10-11 10:15:50
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sjl2735

金虫 (小有名气)
linjl010(金币+1): 2010-10-12 08:51:58
cDNA直接电泳呈现弥散条带。合成时主要是RNA的质量要好，操作时避免RNA酶的降解
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3楼2010-10-11 10:57:00
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
linjl010(金币+1): 2010-10-12 08:53:36
mRNA本身在电泳检测是就是弥散状态，反转录后的cDNA也应该是弥散状态，判断其质量好坏还得通过RT-PCR的方法验证
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5楼2010-10-11 19:48:55
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