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linjl010

银虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】如何检测cDNA的质量

请问如何检测cDNA的质量，其中mRNA序列大约3000bp。另外，合成cDNA实验中应该注意什么？

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1楼 2010-10-11 10:08:25

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ben1147

木虫 (正式写手)

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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-11 17:08:03
linjl010(金币+2): 2010-10-12 08:53:19

cDNA量少，直接跑看不出来什么，即使有弥散也不能说明质量好坏。

纯度的话用跨内含子的housekeeping基因引物P，看产物大小，避免有基因组残余。有符合要求的目的基因的引物更好了，但是表达量少的话容易P不出来

反转要成功，首先RNA要好，操作要小心，RNasin要加，dNTP要新的（至少也是RT专用的）。热变性要充分