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linjl010

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】如何检测cDNA的质量

请问如何检测cDNA的质量,其中mRNA序列大约3000bp。另外,合成cDNA实验中应该注意什么?
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)

linjl010(金币+1): 2010-10-12 08:53:36
mRNA本身在电泳检测是就是弥散状态,反转录后的cDNA也应该是弥散状态,判断其质量好坏还得通过RT-PCR的方法验证
5楼2010-10-11 19:48:55
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)


dhd997(金币+1):很活跃,鼓励交流。 2010-10-11 10:24:58
linjl010(金币+1): 2010-10-12 08:51:26
最好是用PCR来检测了,因为跑胶跑不出来的。
2楼2010-10-11 10:15:50
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sjl2735

金虫 (小有名气)

linjl010(金币+1): 2010-10-12 08:51:58
cDNA直接电泳呈现弥散条带。合成时主要是RNA的质量要好,操作时避免RNA酶的降解
3楼2010-10-11 10:57:00
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ben1147

木虫 (正式写手)


dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-11 17:08:03
linjl010(金币+2): 2010-10-12 08:53:19
cDNA量少,直接跑看不出来什么,即使有弥散也不能说明质量好坏。

纯度的话用跨内含子的housekeeping基因引物P,看产物大小,避免有基因组残余。有符合要求的目的基因的引物更好了,但是表达量少的话容易P不出来

反转要成功,首先RNA要好,操作要小心,RNasin要加,dNTP要新的(至少也是RT专用的)。热变性要充分
4楼2010-10-11 16:29:43
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