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汕头大学海洋科学、生物学、生物与医药接受调剂
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xuelei1987

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】蛋白质测定 已有8人参与

请问用缓冲溶液提取蛋白质的时候,标准曲线空白是用缓冲液呢,还是用蒸馏水,要是想将提取液稀释一定倍数是用蒸馏水稀释,还是用缓冲液?现在对于这个问题,我很纠结,自己觉得测定标准曲线时,蒸馏水都要用缓冲溶液替换掉了!!
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xuelei1987

新虫 (初入文坛)

蛋白质含量测定


lovibond(金币+1):鼓励新虫发帖 2010-10-12 10:34:45
我用缓冲试剂加考马斯亮蓝测定了OD值,吸光度达到0.07,所以我觉得还是用缓冲溶液做标准曲线比较准确,可是现在的问题是用缓冲溶液(0.1mol柠檬酸-0.2mol磷酸氢二钠缓冲溶液)进行测定时,温度较低时有盐析出,我就用水溶液配制了牛血清蛋白,用缓冲试剂做空白计算提取率时可以达到70%多,但用水做再减去缓冲试剂吸光度,提取率只达到40%,这两种计算方法差别咋就这么大呢!再者计算不同缓冲溶液对蛋白质提取率时,都要分开做标准曲线(用缓冲试剂做空白,标准曲线中水用缓冲试剂替代),这样是不是具有可比性呢?不明白,自己对这个问题很迷糊!!请大家帮我想想办法!!!
9楼2010-10-11 23:46:15
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sujf281

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lovibond(金币+1):感谢交流 2010-10-09 21:44:48
稀释时一般都用蒸馏水,如有缓冲溶液,那试剂就用的太多了;空白也用蒸馏配制
3楼2010-09-28 17:25:23
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jjzt518

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
个人认为标准曲线还是用缓冲溶液。
4楼2010-09-29 10:24:22
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红景天水

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lovibond(金币+1):感谢交流 2010-09-29 16:57:29
我们实验室做过的,外文文献也看过的。
要用缓冲液,这样才能有可比性。
当时我们配缓冲液可是5L,5L的配的。
你就多配点缓冲液吧,用量很费的。
不要不舍得啊
5楼2010-09-29 15:15:37
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