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sdluqun

铁杆木虫 (著名写手)

板砖队长

[交流] 【求助/交流】真核基因连接到PET28a质粒上不表达,前面有段信号肽

我现在做重组表达,前期工作,把一段真核基因克隆到pET28a质粒上,基因前面有信号肽序列,测序结果没问题,用终浓度为IPTG 1mmol/L,37摄氏度诱导表达,煮沸菌体,SDS-PAGE检测,没有发现蛋白表达。
请大家给点参考意见,谢谢!
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尔非我焉知我悲喜
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xingxing342

银虫 (小有名气)

sdluqun(金币+1): 2010-10-02 08:24:46
有信号肽干扰,不容易表达的。
可以把信号肽那段基因去掉在表达;或者是换一个标签大的载体PGEX什么的试试。
2楼2010-09-28 10:18:42
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

sdluqun(金币+1): 2010-10-02 08:24:50
我个人认为真核的最好用酵母表达。
3楼2010-09-28 14:18:31
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