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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】真核基因连接到PET28a质粒上不表达，前面有段信号肽
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sdluqun

铁杆木虫 (著名写手)

板砖队长

[交流] 【求助/交流】真核基因连接到PET28a质粒上不表达，前面有段信号肽

我现在做重组表达，前期工作，把一段真核基因克隆到pET28a质粒上，基因前面有信号肽序列，测序结果没问题，用终浓度为IPTG 1mmol/L，37摄氏度诱导表达，煮沸菌体，SDS-PAGE检测，没有发现蛋白表达。
请大家给点参考意见，谢谢！
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尔非我焉知我悲喜
1楼 2010-09-27 20:15:31
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xingxing342

银虫 (小有名气)
sdluqun(金币+1): 2010-10-02 08:24:46
有信号肽干扰，不容易表达的。
可以把信号肽那段基因去掉在表达；或者是换一个标签大的载体PGEX什么的试试。
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2楼2010-09-28 10:18:42
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)
sdluqun(金币+1): 2010-10-02 08:24:50
我个人认为真核的最好用酵母表达。
赞一下 回复此楼
3楼2010-09-28 14:18:31
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