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huling1986

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】液相条件相同,图谱差好多,是怎么回事啊已有8人参与

样品是黄酮粗提物,甲醇溶解,流动相是甲醇和水(含1%乙酸),超声脱气半小时,平衡,梯度洗脱,
0-10min   10%-38%甲醇 ; 10-18min   38%-60%甲醇;18-30min  60%甲醇,流速:1mL/min    检测波长:254nm     柱温不可调,
在这样的条件下,前后做了好几组重复实验,第一组图是这样的,进样量10微升,



然后重复做了几组,进样量5微升,每组的图都很一致,但是保留时间比第一组提前好多,而且这个保留时间刚好应该是流动相甲醇的保留时间,我一般每做一组样后,都会重新平衡一下的,这是后几次的图



麻烦各位帮我分析一下吧
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xkp123

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这个梯度得到的峰好差,梯度需重新设计。样品干净不?保留时间提前的原因有可能是样品比较脏的缘故。
2楼2010-09-15 08:45:17
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13073456851

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
走完一个梯度后,没有重新平衡柱子~~
在梯度上要加上这一步的,不然你想想,上一针最后的有机相浓度比下一阵开始的有机相浓度高了几倍?
子非鱼,焉知鱼之乐?
3楼2010-09-15 08:49:30
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lufq

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
醋酸的浓度没有变化吧?你进以前的样品时间对吗?

样品要保持一致和流动相保持一致分别试一试,找到原因。
4楼2010-09-15 09:11:15
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jiamingw

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 13073456851 at 2010-09-15 08:49:30:
走完一个梯度后,没有重新平衡柱子~~
在梯度上要加上这一步的,不然你想想,上一针最后的有机相浓度比下一阵开始的有机相浓度高了几倍?

我也认为是这个原因,设梯度一般我都会设个完整的,采集时间和整个梯度时间不一样的。最后浓度要回到初始状态。
5楼2010-09-15 10:11:36
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huling1986

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 13073456851 at 2010-09-15 08:49:30:
走完一个梯度后,没有重新平衡柱子~~
在梯度上要加上这一步的,不然你想想,上一针最后的有机相浓度比下一阵开始的有机相浓度高了几倍?

每做完一个梯度,都有重新平衡柱子的,不过是不在梯度内的,用其他method平衡的

[ Last edited by huling1986 on 2010-9-15 at 10:15 ]
6楼2010-09-15 10:13:17
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huling1986

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by xkp123 at 2010-09-15 08:45:17:
这个梯度得到的峰好差,梯度需重新设计。样品干净不?保留时间提前的原因有可能是样品比较脏的缘故。

样品是黄酮粗提物,然后用正丁醇萃取出来的,甲醇溶解
7楼2010-09-15 10:17:49
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huling1986

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by lufq at 2010-09-15 09:11:15:
醋酸的浓度没有变化吧?你进以前的样品时间对吗?

样品要保持一致和流动相保持一致分别试一试,找到原因。

醋酸浓度没有变的,流动相都是一样的,样品除了浓度有差别,其他也也都一样的
8楼2010-09-15 10:18:47
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shuifencun

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
应该是你在第一次加样的时候注射器不干净,导致你的保留时间提前
9楼2010-09-15 10:29:45
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
10楼2010-09-15 10:31:15
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