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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 【求助】求助：液相 吸光度很低 怎么回事？
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whutxd5

[交流] 【求助】求助：液相 吸光度很低 怎么回事？ 已有5人参与

大家帮我看看，我做的类黄酮的HPLC，吸光度很低，不知道这样做出的各化合物的分离度和样品的浓度是否合适，谢谢大家！
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1楼 2010-08-09 11:51:53
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13073456851

金虫 (正式写手)
★ ★
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happy169(金币+1):谢谢参与，欢迎常来分析版 2010-08-10 11:15:25
富集吧
如果信噪比到不了10以上，你是没办法定量的。
另外，依你目前的图看，方法不是很成熟，在下些功夫开发方法吧
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子非鱼，焉知鱼之乐？
2楼2010-08-09 12:12:27
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whutxd5

引用回帖:
Originally posted by 13073456851 at 2010-08-09 12:12:27:
富集吧
如果信噪比到不了10以上，你是没办法定量的。
另外，依你目前的图看，方法不是很成熟，在下些功夫开发方法吧

20-40分钟内出现的几个峰都是我想要的

20-40分钟内的峰，方法学考察肯定要做，我想先按照文献上的方法做好液相条件，再做液质联用，确定了物质之后再买标品进行定量
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3楼2010-08-10 00:09:02
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xiaoxiao7239

木虫 (小有名气)
★ ★
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happy169(金币+1):谢谢参与，欢迎常来分析版 2010-08-10 11:15:31
两种可能:1、上液相的样品浓度太低；2、没有选择样品的最佳吸收波长。类黄酮我记得好像是278nm，不晓得lz用的检测波长是多少。
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4楼2010-08-10 06:44:03
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charlie524

金虫 (小有名气)
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happy169(金币+1):谢谢参与，欢迎常来分析版 2010-08-10 11:15:36
我也在做黄酮的液相，交流下~
你的检测波长是多少啊？另外你用的是制备型还是分析型？你上样的浓度是多少？
貌似我也出现过你这样的情况~并且，我的样品峰比较多，最后结束的时候回出现基线上漂~~~~有啥意见交流下？
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5楼2010-08-10 08:59:25
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色谱工作者

★ ★
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happy169(金币+1):谢谢参与，欢迎常来分析版 2010-08-10 11:15:42
流动相的选择是否合适、波长选择是否合适？
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6楼2010-08-10 09:28:25
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whutxd5

引用回帖:
Originally posted by charlie524 at 2010-08-10 08:59:25:
我也在做黄酮的液相，交流下~
你的检测波长是多少啊？另外你用的是制备型还是分析型？你上样的浓度是多少？
貌似我也出现过你这样的情况~并且，我的样品峰比较多，最后结束的时候回出现基线上漂~~~~有啥意见交流 ...

样品浓度  大约是20mg/ml

我用的是265nm的，但是扫描了一个范围是250-300nm的，发现270nm下各峰的吸光度大些

我想做图谱分析，不知怎样增大分离度呢？我用的是乙腈和PH4的甲酸水做梯度。

我觉得最后那两个峰像溶剂峰


是265nm下的，扫描是在250-300nm，发现在270nm的吸光度要大些，这个下次会改进的。中间的峰很密集，可我不知道怎样改善。

DAD的监测器，我是用乙腈和甲酸水做的梯度，乙腈从初始的10%到最后的100%，应该如何让调整流动相比例才能分开这些极性相似的峰呢？中间有两个好像是同分异构体的峰。
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7楼2010-08-12 00:27:05
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whutxd5

引用回帖:
Originally posted by xiaoxiao7239 at 2010-08-10 06:44:03:
两种可能:1、上液相的样品浓度太低；2、没有选择样品的最佳吸收波长。类黄酮我记得好像是278nm，不晓得lz用的检测波长是多少。

样品浓度  大约是20mg/ml

我用的是265nm的，但是扫描了一个范围是250-300nm的，发现270nm下各峰的吸光度大些

我想做图谱分析，不知怎样增大分离度呢？我用的是乙腈和PH4的甲酸水做梯度。

我觉得最后那两个峰像溶剂峰


是265nm下的，扫描是在250-300nm，发现在270nm的吸光度要大些，这个下次会改进的。中间的峰很密集，可我不知道怎样改善。

DAD的监测器，我是用乙腈和甲酸水做的梯度，乙腈从初始的10%到最后的100%，应该如何让调整流动相比例才能分开这些极性相似的峰呢？中间有两个好像是同分异构体的峰。
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8楼2010-08-12 00:27:22
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charlie524

金虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by whutxd5 at 2010-08-12 00:27:05:



样品浓度  大约是20mg/ml

我用的是265nm的，但是扫描了一个范围是250-300nm的，发现270nm下各峰的吸光度大些

我想做图谱分析，不知怎样增大分离度呢？我用的是乙腈和PH4的甲酸水做梯度。

我觉得最 ...

我的信号强度跟你的也差不多~~~你用甲酸水？还是甲醇水？另外，你黄酮的溶解性好吗？进样量是多少？还有你的样品原料是啥？物质咋吗？我的峰的分离度不是很好~~~有时都凑在一起
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9楼2010-08-12 08:59:07
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