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whutxd5

[交流] 【求助】求助:液相 吸光度很低 怎么回事? 已有5人参与

大家帮我看看,我做的类黄酮的HPLC,吸光度很低,不知道这样做出的各化合物的分离度和样品的浓度是否合适,谢谢大家!

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whutxd5

引用回帖:
Originally posted by xiaoxiao7239 at 2010-08-10 06:44:03:
两种可能:1、上液相的样品浓度太低;2、没有选择样品的最佳吸收波长。类黄酮我记得好像是278nm,不晓得lz用的检测波长是多少。

样品浓度  大约是20mg/ml

我用的是265nm的,但是扫描了一个范围是250-300nm的,发现270nm下各峰的吸光度大些

我想做图谱分析,不知怎样增大分离度呢?我用的是乙腈和PH4的甲酸水做梯度。

我觉得最后那两个峰像溶剂峰


是265nm下的,扫描是在250-300nm,发现在270nm的吸光度要大些,这个下次会改进的。中间的峰很密集,可我不知道怎样改善。

DAD的监测器,我是用乙腈和甲酸水做的梯度,乙腈从初始的10%到最后的100%,应该如何让调整流动相比例才能分开这些极性相似的峰呢?中间有两个好像是同分异构体的峰。
8楼2010-08-12 00:27:22
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13073456851

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
happy169(金币+1):谢谢参与,欢迎常来分析版 2010-08-10 11:15:25
富集吧
如果信噪比到不了10以上,你是没办法定量的。
另外,依你目前的图看,方法不是很成熟,在下些功夫开发方法吧
子非鱼,焉知鱼之乐?
2楼2010-08-09 12:12:27
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whutxd5

引用回帖:
Originally posted by 13073456851 at 2010-08-09 12:12:27:
富集吧
如果信噪比到不了10以上,你是没办法定量的。
另外,依你目前的图看,方法不是很成熟,在下些功夫开发方法吧

20-40分钟内出现的几个峰都是我想要的

20-40分钟内的峰,方法学考察肯定要做,我想先按照文献上的方法做好液相条件,再做液质联用,确定了物质之后再买标品进行定量
3楼2010-08-10 00:09:02
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xiaoxiao7239

木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
happy169(金币+1):谢谢参与,欢迎常来分析版 2010-08-10 11:15:31
两种可能:1、上液相的样品浓度太低;2、没有选择样品的最佳吸收波长。类黄酮我记得好像是278nm,不晓得lz用的检测波长是多少。
4楼2010-08-10 06:44:03
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