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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 【求助】HPLC出峰问题
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pang0807

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】HPLC出峰问题 已有18人参与

请教下各位虫友~~本人用HPLC进样品，大概两三分钟就出峰，后面几乎没有峰了~而且分离效果也不好~峰没怎么分开（如图）我用的流动相是乙腈：水（20：80），检测波长273（通过紫外测出来的最大吸收波长），样品是用纯甲醇溶的~我用纯甲醇进过样，2、3分钟的峰好像也不是甲醇峰~~请教下各位虫友，这么早的峰到底能不能要啊？如果要的话怎样能把峰分开呢？十分感谢~~
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长乐未央
1楼 2010-09-11 00:11:39
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yangqiang10

金虫 (正式写手)

林风
★
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你的流动相怎么配的  ，纯甲醇进样也出来2，3分钟的峰？不解，能说明白点吗
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一切皆有可能
2楼2010-09-11 01:34:49
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bigpalewolf

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
把峰往后推推，10%乙腈，另外用50%乙腈溶解样品进样。
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3楼2010-09-11 03:07:31
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menghai

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
样品极性较大，减小流动相洗脱强度，或者加入其它试剂，增大样品保留时间和分离度
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4楼2010-09-11 11:11:04
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致死之眠

金虫 (知名作家)

梦幻初音
★ ★
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xiaodu2007693(金币+1):同意 2010-09-12 00:33:37
样品出来了没，我怀疑样品根本不在5min之前，没出来
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Iamendlishdi,Myenglishisveryhaoveryqiangda
5楼2010-09-11 15:26:09
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libocpu

木虫 (小有名气)
★
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Originally posted by 致死之眠 at 2010-09-11 15:26:09:
样品出来了没，我怀疑样品根本不在5min之前，没出来

严重同意，一定要先试强洗脱能力的流动相，再试低洗脱能力的，否组主峰一直在柱上没下来，会影响你对条件优化的判断。
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6楼2010-09-11 15:30:20
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pang0807

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 致死之眠 at 2010-09-11 15:26:09:
样品出来了没，我怀疑样品根本不在5min之前，没出来

我用纯甲醇进了一针~几乎没什么峰，只有几个基本上可以乎略不计的小峰~如果这几个峰不是样品会是什么呢？我也走过梯度大概一个多小时，除了前面几个峰以外基本上也没有什么峰
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长乐未央
7楼2010-09-11 17:27:15
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pang0807

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by bigpalewolf at 2010-09-11 03:07:31:
把峰往后推推，10%乙腈，另外用50%乙腈溶解样品进样。

好的~谢谢~弱弱的问一下，溶解样品时乙腈的浓度有什么影响吗？为什么要用50%的呢？
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长乐未央
8楼2010-09-11 18:35:33
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Cpuli87

木虫 (正式写手)
★
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估计是样品的极性太大了，用甲醇水试试看吧！或者把乙腈的浓度降低点！
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9楼2010-09-11 19:41:10
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lwhcay

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
为了确定下样品峰是否出来，可以断开柱子直接接检测器，积分算一下峰面积看看与两三分钟这些峰是否一致
如果确定了是样品峰，要调节流动相来增加保留时间，这个条件下保留太弱不可能与杂质分离
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10楼2010-09-11 21:19:17
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