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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 【求助】HPLC高手请进
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陶陶小子

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】HPLC高手请进 已有20人参与

各位大虾，小弟我遇到一问题，请帮忙研究下！
由于我们实验室的液相仪比较古老，流动相需要手工配制。前几天摸索出一流动相的比例，而这几天用相同比例的流动相时，发现出峰时间提前2-3分钟左右，后来又重新配置一相同比例的流动相，比前者又提前半分钟左右，而且发现两峰的分离度也变差了。请问这是什么情况。柱子是刚买的。
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好好实验，安全毕业，快速闪人
1楼 2010-04-21 10:14:02
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apple04

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
柱温相同吗？
有没有恒温箱啊？
没有的话，柱温也就是室温，
室温不同就会影响出峰时间。
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2楼2010-04-21 10:37:23
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yuzhen719

木虫 (正式写手)
★
xiaodu2007693(金币+1):谢谢交流，说得很对，建议各自滤完再混合测密度 2010-04-21 11:03
流动相配好后过滤还是各自过滤后在混匀配制？
有时流动相配好后过滤，在过滤时有机相可能会被抽走，因此导致每次出峰时间的差别
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3楼2010-04-21 10:59:14
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陶陶小子

银虫 (小有名气)
是配好后过滤的。因为要加十二烷基硫酸钠固体溶解的。
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好好实验，安全毕业，快速闪人
4楼2010-04-21 12:25:07
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陶陶小子

银虫 (小有名气)
对了，如果流动相在过滤时流失的话，应该延迟出峰啊。
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好好实验，安全毕业，快速闪人
5楼2010-04-21 12:26:12
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zhaoxingw1

金虫 (小有名气)
★
wtf66(金币+1):谢谢参与 2010-04-21 13:00
我觉得柱温的影响不大，因为时间间隔不大
可能是洗脱液之前柱子没有预先平衡，或者说是平衡时间不同
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6楼2010-04-21 12:34:07
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cninfe

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
wtf66(金币+1):谢谢参与 2010-04-21 13:04
酸性可以影响出峰时间，适当的调节一下PH值。或者有机相比例该小些，
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7楼2010-04-21 13:03:17
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kunpenghai

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有时流动相配置体积大重现性不好
溶剂挥发的量不同
乙腈或甲醇的量多一滴保留时间可能提前一分钟
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8楼2010-04-21 13:19:34
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随风zsm

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
wtf66(金币+1):谢谢参与 2010-04-21 13:59
流动相配比一定的情况下，过滤与否可能影响流动相极性；此外，柱温影响会较大，笔者曾经碰见过早上色谱峰分离度较好，但中午时段分离度明显变差的情况
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9楼2010-04-21 13:44:05
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陶陶小子

银虫 (小有名气)
没有柱温箱。因为是做药物的质量分析，所以柱子，流动相，流速都是按照药典要求。流动相的ph=2.45左右，流速2ml/min,温度就是室温。是不是，流速太大或ph，导致柱效降低
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好好实验，安全毕业，快速闪人
10楼2010-04-21 14:35:44
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