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【求助/交流】超大片段连接问题 已有6人参与
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我的是两个一万多bp的载体相连，将这两个载体用EcoRI单酶切，然后连接，转化后抗生素的板上，菌落是长满板的，然后做菌落PCR，一条带都没有（我的目的条带一个是3000多一个是5000多），不知道是没有连进去还是PCR片段太大没有扩出条带来。 望高手能帮忙解答，不胜感激！！（附：其中还有一个问题就是 EcoRI单酶切是将环状质粒切成一条线性片段，多次酶切后每次跑胶都是酶切后比酶切前跑得快，也就是线性片段比环状质粒跑的快，不知道是酶切的问题，还是属于正常现象） |
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