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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 【求助】流动相梯度洗脱问题
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tyjackie

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助】流动相梯度洗脱问题 已有8人参与

按照药典要求，采用甲醇-磷酸盐两相梯度洗脱时，由于仪器比例阀的问题，出峰时间相差很大，对照品峰面积波动也超过了10%
想请教下，有没有朋友遇到过这样的问题，是不是梯度变化的不稳定，也会导致峰面积的变化。
P：以前只知道流速不同，峰面积会有较大变化
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1楼 2010-08-30 10:26:35
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wang861216

铜虫 (初入文坛)
★
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梯度变化不稳定   能不能检测到实际的梯度？如果变化较大  应该能影响峰面积
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2楼2010-08-30 10:46:29
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diannao001

铁杆木虫 (小有名气)
★
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你怎么知道是比例阀的问题？如果是它问题的话，你的仪器需要进行校正了。另外检查一下进样器是不是也有误差？梯度洗脱应该不会对峰面积影响很大的，我一直都用梯度做方法学实验。
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3楼2010-08-30 10:51:04
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tyjackie

木虫 (正式写手)
应该是比例阀的问题，但是现在想确认的是，在流速不变的情况下，梯度洗脱时候，两相比例波动较大，是否会导致峰面积的波动？
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4楼2010-08-30 10:54:18
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lemonin2008

铁杆木虫 (正式写手)
★
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会不会恢复初始梯度后平衡时间不够
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5楼2010-08-30 11:10:40
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tyjackie

木虫 (正式写手)
不会，回复初始梯度平衡时间15min，前期研究表明足够 了
一般5-6min就平衡了
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6楼2010-08-30 11:24:32
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lemonin2008

铁杆木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by tyjackie at 2010-08-30 10:26:35:
按照药典要求，采用甲醇-磷酸盐两相梯度洗脱时，由于仪器比例阀的问题，出峰时间相差很大，对照品峰面积波动也超过了10%
想请教下，有没有朋友遇到过这样的问题，是不是梯度变化的不稳定，也会导致峰面积的变化。 ...

去年有一次吧，在一周内做实验都很怪异，做梯度走样品时保留时间变动幅度很大，峰面积有没有变化记不得了，但后来再作就又没事了
我觉得如果你之前用这台仪器都很好的话，仪器应该没有问题的
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7楼2010-08-30 11:50:02
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tyjackie

木虫 (正式写手)
下午换台机子做做看
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8楼2010-08-30 12:07:19
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ljh616528

金虫 (正式写手)
★
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你是手动还是自动进样？如果是手动的话，会不会进样阀里有残留？
温度也会导致保留时间变化
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平安是福
9楼2010-08-30 12:18:12
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mayanstude

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
差个两三分钟很正常的。本人最近也在做梯度。流动相是磷酸缓冲盐和乙腈。走梯度有几个不好，1.基线不稳定，2.重现性不好。3.带来一些鬼峰。这些事可以说的过去的
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不忘初心，方的始终
10楼2010-09-03 17:11:28
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