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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【分享】质粒的抽提
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vivihao

金虫 (小有名气)

[交流] 【分享】质粒的抽提 已有5人参与

发现一个现象和大家分享一下：碱裂解法抽提质粒，如果8000rpm集菌时，下面出现一些黑点，可能是一些别的菌，具体是什么菌不了解；当加入溶液三时，若上面出现较多泡沫，加入异丙醇沉淀时不出来白色的沉淀，说明摇菌没有成功，插入的目标质粒没有转化成功，培养基被其他的一些菌污染了。
不知道别的同学遇到这样的情况没？
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1楼 2010-08-27 16:44:10
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jia1012428

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我个人觉得还是看电泳图比较把握。
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2楼2010-08-27 19:22:16
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怎么都行

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):有一定的道理 2010-08-27 20:37:07
加入异丙醇沉淀时不出来白色沉淀不一定是目的质粒没有转化成功，我曾经有一次遇到过这种情况：摇菌时间过长，菌液浓度太大，菌体量过多，导致第一步裂解菌体时裂解的不充分，最后质粒就提不出来。
遇到这种情况，可以增加每个步骤试剂的用量，或者减少菌体的使用量就可以解决。
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3楼2010-08-27 20:11:49
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434744419

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我的也提不出来 菌摇的很好 就是提不出来 加入P2就是不澄清！菌体少也不澄清
1请高手指点！以前都可以提出来。  是因为载体片段太大（13000bp）还是因为拷贝数太低啊！怎样解决！
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4楼2010-08-28 20:21:45
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434744419

金虫 (小有名气)

提不出来

我的也提不出来 菌摇的很好 就是提不出来 加入P2就是不澄清！菌体少也不澄清
1请高手指点！以前都可以提出来。  是因为载体片段太大（13000bp）还是因为拷贝数太低啊！怎样解决！
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5楼2010-08-28 20:22:15
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果8000rpm集菌时，下面出现一些黑点，可能是一些别的菌，具体是什么菌不了解

这个是如何判断出来的 ？
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微生物发酵
6楼2010-08-29 08:18:37
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airzzy

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
还有个问题就是定量究竟是怎么样才比较准确呢？先跑电泳再定量吗？
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7楼2010-08-31 17:57:35
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