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vivihao

金虫 (小有名气)

[交流] 【分享】质粒的抽提 已有5人参与

发现一个现象和大家分享一下:碱裂解法抽提质粒,如果8000rpm集菌时,下面出现一些黑点,可能是一些别的菌,具体是什么菌不了解;当加入溶液三时,若上面出现较多泡沫,加入异丙醇沉淀时不出来白色的沉淀,说明摇菌没有成功,插入的目标质粒没有转化成功,培养基被其他的一些菌污染了。
不知道别的同学遇到这样的情况没?
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jia1012428

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我个人觉得还是看电泳图比较把握。
2楼2010-08-27 19:22:16
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怎么都行

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
silicare(金币+1):有一定的道理 2010-08-27 20:37:07
加入异丙醇沉淀时不出来白色沉淀不一定是目的质粒没有转化成功,我曾经有一次遇到过这种情况:摇菌时间过长,菌液浓度太大,菌体量过多,导致第一步裂解菌体时裂解的不充分,最后质粒就提不出来。
遇到这种情况,可以增加每个步骤试剂的用量,或者减少菌体的使用量就可以解决。
3楼2010-08-27 20:11:49
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434744419

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我的也提不出来 菌摇的很好 就是提不出来 加入P2就是不澄清!菌体少也不澄清
1请高手指点!以前都可以提出来。  是因为载体片段太大(13000bp)还是因为拷贝数太低啊!怎样解决!
4楼2010-08-28 20:21:45
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434744419

金虫 (小有名气)

提不出来

我的也提不出来 菌摇的很好 就是提不出来 加入P2就是不澄清!菌体少也不澄清
1请高手指点!以前都可以提出来。  是因为载体片段太大(13000bp)还是因为拷贝数太低啊!怎样解决!
5楼2010-08-28 20:22:15
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hkfgwww

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果8000rpm集菌时,下面出现一些黑点,可能是一些别的菌,具体是什么菌不了解

这个是如何判断出来的 ?
微生物发酵
6楼2010-08-29 08:18:37
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airzzy

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
还有个问题就是定量究竟是怎么样才比较准确呢?先跑电泳再定量吗?
7楼2010-08-31 17:57:35
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