Originally posted by sqhnsd at 2010-08-29 14:34:00:

这个我也有点困惑，50nM的NACL是不会引起蛋白沉淀的。你考虑下纯化好蛋白，在加咪唑之前直接将柱料加入肠激酶的buffer，然后加入肠激酶，之后离心去除His-tag，你试过没有

Originally posted by dudu1161 at 2010-08-25 15:48:02:
虫友们，大家好！请教大家一个问题，不胜感激。
    蛋白纯化时洗脱缓冲液为300 mM NaCl; 350 mM imidazole,50 mM sodium phosphate buffer, pH 8.0。因为后续实验要肠激酶切割，所以用肠激酶缓冲液来透析，但是 ...

Originally posted by sqhnsd at 2010-08-25 17:00:57:
可以用pH8.0的buffer,然后调节至pH7.4.还有，你可以透析直接透析你的蛋白，然后加一点（0.1-0.5% saryksal，一种阴离子去垢剂）溶解你的蛋白，不过之前你要测试一下肠激酶在这种条件下有没有活性，

Originally posted by dudu1161 at 2010-08-29 11:43:47:


感谢指点，因为实验室没有 saryksal，所以我就用1*肠激酶缓冲液透析（调节pH至8.4），对照组是0.01*肠激酶缓冲液透析（调节pH至8.4），结果透析过夜后1*沉淀，0.01*未沉淀，不知道这其中的原因是什么？
冻干 ...