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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教基因组的纯化方法。
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adslye

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请教基因组的纯化方法。 已有3人参与

提了基因组，准备做walking。
纯化是用的酚氯仿抽提，然后醇沉。
但提纯有一步用到糖原。
最后析出DNA的配方是：95醇，醋酸钠，糖原。
虽然糖原有助于DNA的沉淀，我想没有应该也没问题。
你们认为呢？

另外，请问各位还知道什么纯化基因组的方法吗？

[ Last edited by adslye on 2010-8-8 at 17:09 ]
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1楼 2010-08-08 17:07:07
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):最近很积极~~ 2010-08-08 21:38:01
没加过糖原 。。。。就是用1/10体积的醋酸钠  跟 2倍体积的无水乙醇
赞一下(2人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-08-08 18:13:01
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adslye

银虫 (正式写手)
哦，我查了，不加的确可以。
不过加了效果更好，sigma有专门的糖原，500ul，250RMB
还挺贵的。可以用500次。
多谢啊，不过你还有什么别的纯化DNA的方法吗？
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3楼2010-08-08 19:46:29
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):热心的ben~ 2010-08-08 21:37:41
糖原作为核酸沉淀的担体，有利于提高沉淀效率。但是如果你的样品量不是太小的话，基因组DNA一般不需要外加糖原促进沉淀，1/10体积的3M醋酸钠和大于2倍体积（推荐2.5倍）的乙醇足以沉淀DNA
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4楼2010-08-08 21:20:19
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adslye

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-08-08 21:20:19:
糖原作为核酸沉淀的担体，有利于提高沉淀效率。但是如果你的样品量不是太小的话，基因组DNA一般不需要外加糖原促进沉淀，1/10体积的3M醋酸钠和大于2倍体积（推荐2.5倍）的乙醇足以沉淀DNA

哦，明白了！多谢。我可以用异丙醇来沉淀吗？用异丙醇是不是沉淀效率要高于乙醇，这样也就可以弥补我不用糖原的地方了？

多谢~~
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5楼2010-08-08 21:29:42
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
lstt09nk(金币+1):欢迎交流~~ 2010-08-08 21:48:18
引用回帖:
Originally posted by adslye at 2010-08-08 21:29:42:


哦，明白了！多谢。我可以用异丙醇来沉淀吗？用异丙醇是不是沉淀效率要高于乙醇，这样也就可以弥补我不用糖原的地方了？

多谢~~

异丙醇的好处是用量小
比如说在1.5的管里面，如果DNA溶液多于500ul就没法用乙醇沉淀了，装不下两倍体积，用异丙醇就可以

但是说到沉淀效率，我感觉还是乙醇好一点，经常用异丙醇沉不出来东西，搞得很郁闷。而且异丙醇也不好闻
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6楼2010-08-08 21:47:20
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