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adslye

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请教基因组的纯化方法。 已有3人参与

提了基因组,准备做walking。
纯化是用的酚氯仿抽提,然后醇沉。
但提纯有一步用到糖原。
最后析出DNA的配方是:95醇,醋酸钠,糖原。
虽然糖原有助于DNA的沉淀,我想没有应该也没问题。
你们认为呢?

另外,请问各位还知道什么纯化基因组的方法吗?

[ Last edited by adslye on 2010-8-8 at 17:09 ]
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

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★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):最近很积极~~ 2010-08-08 21:38:01
没加过糖原 。。。。就是用1/10体积的醋酸钠  跟 2倍体积的无水乙醇
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-08-08 18:13:01
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adslye

银虫 (正式写手)

哦,我查了,不加的确可以。
不过加了效果更好,sigma有专门的糖原,500ul,250RMB
还挺贵的。可以用500次。
多谢啊,不过你还有什么别的纯化DNA的方法吗?
3楼2010-08-08 19:46:29
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):热心的ben~ 2010-08-08 21:37:41
糖原作为核酸沉淀的担体,有利于提高沉淀效率。但是如果你的样品量不是太小的话,基因组DNA一般不需要外加糖原促进沉淀,1/10体积的3M醋酸钠和大于2倍体积(推荐2.5倍)的乙醇足以沉淀DNA
4楼2010-08-08 21:20:19
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adslye

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-08-08 21:20:19:
糖原作为核酸沉淀的担体,有利于提高沉淀效率。但是如果你的样品量不是太小的话,基因组DNA一般不需要外加糖原促进沉淀,1/10体积的3M醋酸钠和大于2倍体积(推荐2.5倍)的乙醇足以沉淀DNA

哦,明白了!多谢。我可以用异丙醇来沉淀吗?用异丙醇是不是沉淀效率要高于乙醇,这样也就可以弥补我不用糖原的地方了?

多谢~~
5楼2010-08-08 21:29:42
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ben1147

木虫 (正式写手)


lstt09nk(金币+1):欢迎交流~~ 2010-08-08 21:48:18
引用回帖:
Originally posted by adslye at 2010-08-08 21:29:42:


哦,明白了!多谢。我可以用异丙醇来沉淀吗?用异丙醇是不是沉淀效率要高于乙醇,这样也就可以弥补我不用糖原的地方了?

多谢~~

异丙醇的好处是用量小
比如说在1.5的管里面,如果DNA溶液多于500ul就没法用乙醇沉淀了,装不下两倍体积,用异丙醇就可以

但是说到沉淀效率,我感觉还是乙醇好一点,经常用异丙醇沉不出来东西,搞得很郁闷。而且异丙醇也不好闻
6楼2010-08-08 21:47:20
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