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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大肠杆菌表达的目的蛋白没活性，可以考虑换什么表达载体？
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adslye

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌表达的目的蛋白没活性，可以考虑换什么表达载体？已有6人参与

在做原核表达，但表达的蛋白做酶活怎么都没活性。
由于来自植物中的羟化酶，担心是大肠杆菌合成不了那么高级的酶。
不知道有什么载体可以换的？
比如：
枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和肠膜明串球菌等等。
这些表达载体各有什么特点呢？

新手求助，多谢！
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1楼2010-08-05 20:50:29
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xinyaolu

木虫 (小有名气)
★
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如果该蛋白在植物里头必须后修饰才有酶活的话，可能还是真核表达更适合。大肠表达可以尝试使用一些帮助折叠的伴侣分子和宿主。
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3楼2010-08-06 10:22:01
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adslye

银虫 (正式写手)
有具体点的吗？
换真核表达系统麻烦吗？
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4楼2010-08-06 13:52:25
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diana0423

金虫 (小有名气)
★
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可以换真核表达系统试试，在酵母中表达相对比较麻烦，要把质粒线性化后整合到酵母染色体中表达，具体做法可以参考生物公司给的操作手册
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5楼2010-08-06 13:58:19
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stliimoon

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议真核表达，大肠合成后修饰很少的，复杂的蛋白就不一定能够正确合成，真核的表达系统如酵母可以
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6楼2010-08-06 15:48:19
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