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ffrc

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于DNA提取的问题。请高手赐教 已有9人参与

请高手赐教以下问题。
我提DNA过程中,先后用裂解液、饱和酚、酚仿醇(25:24:1)、氯仿、酒精、75%酒精。最后用TE溶解。
此过程没有用RNase。
这个过程提取下来的DNA有RNA干扰,有蛋白残留。
请问如何将这个粗提的DNA纯化。
在哪里加RNase,加多少,如何一步步纯化。
请细告知。谢谢
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匿名

用户注销 (正式写手)


ffrc(金币+1):谢谢参与
本帖仅楼主可见
7楼2010-08-05 00:00:55
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louli

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★
ffrc(金币+1):谢谢参与
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-05 06:05:32
引用回帖:
Originally posted by ffrc at 2010-08-04 21:45:11:
请高手赐教以下问题。
我提DNA过程中,先后用裂解液、饱和酚、酚仿醇(25:24:1)、氯仿、酒精、75%酒精。最后用TE溶解。
此过程没有用RNase。
这个过程提取下来的DNA有RNA干扰,有蛋白残留。
请问如何将这个粗 ...

加完裂解液之后,水浴65°一个小时,降至室温,加入5微升的RNAse,如果蛋白含量高,加饱和酚抽提,然后加入等体积的氯仿异戊醇(24:1),离心,取上清,加十分之一体积的乙酸钠和等体积的异丙醇,离心10min。用76%的乙醇离心5min洗涤,再用70%的乙醇洗涤,晾干,一般用水溶解。
2楼2010-08-04 22:25:00
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hustxiong

木虫 (正式写手)


ffrc(金币+1):谢谢参与
要看看 你用的是什么裂解液了,CTAB,SDS 等都是PCR抑制剂,彻底清除需要相应试剂的剂量把握,比如用醋酸钾除SDS。
建议  购买DNA纯化试剂盒,这样后续试验会顺利很多,国产的 一般不会太贵,效果都还不错。原理就是通过硅胶柱吸附后, 再洗脱。
3楼2010-08-04 22:38:43
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accident1256

铜虫 (小有名气)


ffrc(金币+1):谢谢参与
看试剂盒的说明书~~
人各有命~
4楼2010-08-04 22:45:21
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