24小时热门版块排行榜    

查看: 2413  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ffrc

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于DNA提取的问题。请高手赐教 已有9人参与

请高手赐教以下问题。
我提DNA过程中,先后用裂解液、饱和酚、酚仿醇(25:24:1)、氯仿、酒精、75%酒精。最后用TE溶解。
此过程没有用RNase。
这个过程提取下来的DNA有RNA干扰,有蛋白残留。
请问如何将这个粗提的DNA纯化。
在哪里加RNase,加多少,如何一步步纯化。
请细告知。谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~!


ffrc(金币+1):谢谢参与
ffrc(金币+5):有道理 2010-08-05 12:55:27
请问LZ是提什么的DNA?好像蛋白的话,可以用酚仿多纯化几次,就是说  加入等体积饱和酚/氯仿/异戊醇(25:24:1),上下颠倒数次混匀。   这一步多几次,可以得到比较清的DNA上清液,再用酒精等纯化……RNA不是很容易降解吗?还有,我们自然风干后,一般用水溶解,不用TE,TE好像对PCR有影响……
10楼2010-08-05 11:38:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

louli

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★
ffrc(金币+1):谢谢参与
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-05 06:05:32
引用回帖:
Originally posted by ffrc at 2010-08-04 21:45:11:
请高手赐教以下问题。
我提DNA过程中,先后用裂解液、饱和酚、酚仿醇(25:24:1)、氯仿、酒精、75%酒精。最后用TE溶解。
此过程没有用RNase。
这个过程提取下来的DNA有RNA干扰,有蛋白残留。
请问如何将这个粗 ...

加完裂解液之后,水浴65°一个小时,降至室温,加入5微升的RNAse,如果蛋白含量高,加饱和酚抽提,然后加入等体积的氯仿异戊醇(24:1),离心,取上清,加十分之一体积的乙酸钠和等体积的异丙醇,离心10min。用76%的乙醇离心5min洗涤,再用70%的乙醇洗涤,晾干,一般用水溶解。
2楼2010-08-04 22:25:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hustxiong

木虫 (正式写手)


ffrc(金币+1):谢谢参与
要看看 你用的是什么裂解液了,CTAB,SDS 等都是PCR抑制剂,彻底清除需要相应试剂的剂量把握,比如用醋酸钾除SDS。
建议  购买DNA纯化试剂盒,这样后续试验会顺利很多,国产的 一般不会太贵,效果都还不错。原理就是通过硅胶柱吸附后, 再洗脱。
3楼2010-08-04 22:38:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

accident1256

铜虫 (小有名气)


ffrc(金币+1):谢谢参与
看试剂盒的说明书~~
人各有命~
4楼2010-08-04 22:45:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +10 基诺咪客 2026-08-17 14/700 2026-08-19 10:34 by 基诺咪客
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +7 kkkl_v 2026-08-19 7/350 2026-08-19 10:28 by pfeng
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +4 ziyangfang 2026-08-19 4/200 2026-08-19 10:23 by JChen2024
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +8 启萌科技 2026-08-12 30/1500 2026-08-19 10:22 by 启萌科技
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +52 医学老男孩 2026-08-13 114/5700 2026-08-19 09:38 by 医学老男孩
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +4 Tide man 2026-08-12 5/250 2026-08-19 07:41 by 201120518022
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +3 瞬息宇宙 2026-08-15 3/150 2026-08-18 21:40 by xiaohuixin
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
信息提示
请填处理意见