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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】NdeI/XhoI和BglII/XhoI这两对内切酶效率如何？
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wh7690703

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】NdeI/XhoI和BglII/XhoI这两对内切酶效率如何？ 已有5人参与

如题，请问NdeI/XhoI和BglII/XhoI这两对内切酶效率如何？怎么做才能尽量减少双切不彻底的情况出现？

每当双切片段和载体连接时，总是出现假阳性。郁闷啊！

恳请高手帮忙啊
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1楼 2010-08-03 11:05:35
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
wh7690703(金币+1): 2010-08-18 20:29:43
wh7690703(金币+1):哦，谢谢 那我再试试。 还有，筛阳性重组子进行双酶切验证时，总会有很多的质粒切出T-载体大小的片段。请问这难道是回收目的片段不干净，含有切下来的T-载体吗？ 2010-08-18 20:32:17
是在第二步酶切的时候同时做去磷酸化吗？不建议你这么做，因为两种酶的buffer不一样，有可能会对酶的活性产生抑制
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
14楼2010-08-18 17:49:41
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jqq1985

银虫 (正式写手)
★
看天(金币+1):鼓励交流 2010-08-03 13:24:26
wh7690703(金币+1): 2010-08-04 09:34:49
NdeI不是很稳定。酶切效果很难说。XhoI ，BglII比较好用。双酶切效率与很多因素有关，两个酶切位点的距离太近也会影响酶切效率。
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2楼2010-08-03 12:49:01
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
wh7690703(金币+1): 2010-08-04 09:35:12
我用过这两组酶，NEB和Fermentas都还是不错的
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3楼2010-08-03 13:36:55
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wh7690703

木虫 (正式写手)
我使用的是Takara的酶，两组酶酶切总是不彻底，根本就筛选不到阳性克隆子
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4楼2010-08-04 09:36:32
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