应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】NdeI/XhoI和BglII/XhoI这两对内切酶效率如何？
51/1返回列表
查看: 2451  |  回复: 17
查看全部回帖@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wh7690703

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】NdeI/XhoI和BglII/XhoI这两对内切酶效率如何？已有5人参与

如题，请问NdeI/XhoI和BglII/XhoI这两对内切酶效率如何？怎么做才能尽量减少双切不彻底的情况出现？

每当双切片段和载体连接时，总是出现假阳性。郁闷啊！

恳请高手帮忙啊
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2010-08-03 11:05:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
lstt09nk(金币+2):方法不错~ 2010-08-18 12:53:55
wh7690703(金币+1): 2010-08-18 13:38:13
减少酶切不彻底的方法：分步交叉酶切，比如你用NdeI/XhoI来切，可以先分别用NdeI和XhoI单切，跑胶验证是否都能切开，如果可以，则再分别用XhoI和NdeI进行第二步酶切。
赞一下(1人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
12楼2010-08-18 12:31:38
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
wh7690703(金币+1): 2010-08-18 20:29:43
wh7690703(金币+1):哦，谢谢 那我再试试。 还有，筛阳性重组子进行双酶切验证时，总会有很多的质粒切出T-载体大小的片段。请问这难道是回收目的片段不干净，含有切下来的T-载体吗？ 2010-08-18 20:32:17
是在第二步酶切的时候同时做去磷酸化吗？不建议你这么做，因为两种酶的buffer不一样，有可能会对酶的活性产生抑制
赞一下 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
14楼2010-08-18 17:49:41
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
wh7690703(金币+1):呵呵，我说的问题是这样的：不过有个奇怪的现象：当双切目的片段和双切表达载体连接转化后，筛阳性重组子进行双酶切验证时，总会有很多的质粒切出T-载体大小的片段。 即切不出表达载体片段。 2010-08-19 09:40:46
不好意，不知道你现在是装表达载体，照你这么说应该是片段没切完全，重新切一下再做吧

[ Last edited by 空谷幽风 on 2010-8-19 at 09:46 ]
赞一下 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
16楼2010-08-18 22:39:55
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wh7690703 at 2010-08-18 20:30:25:
请问楼上的，一般酶切几小时为好？

常规限制性内切酶一般切2小时就可以了，fermentas的快切酶一般切10-15min，时间长了容易出现星活性
赞一下 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
17楼2010-08-18 22:45:25
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wh7690703 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭