24小时热门版块排行榜    

查看: 3131  |  回复: 17
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wh7690703

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】NdeI/XhoI和BglII/XhoI这两对内切酶效率如何? 已有5人参与

如题,请问NdeI/XhoI和BglII/XhoI这两对内切酶效率如何?怎么做才能尽量减少双切不彻底的情况出现?

每当双切片段和载体连接时,总是出现假阳性。郁闷啊!

恳请高手帮忙啊
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)

★ ★
lstt09nk(金币+2):方法不错~ 2010-08-18 12:53:55
wh7690703(金币+1): 2010-08-18 13:38:13
减少酶切不彻底的方法:分步交叉酶切,比如你用NdeI/XhoI来切,可以先分别用NdeI和XhoI单切,跑胶验证是否都能切开,如果可以,则再分别用XhoI和NdeI进行第二步酶切。
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
12楼2010-08-18 12:31:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

jqq1985

银虫 (正式写手)


看天(金币+1):鼓励交流 2010-08-03 13:24:26
wh7690703(金币+1): 2010-08-04 09:34:49
NdeI不是很稳定。酶切效果很难说。XhoI ,BglII比较好用。双酶切效率与很多因素有关,两个酶切位点的距离太近也会影响酶切效率。
2楼2010-08-03 12:49:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

wh7690703(金币+1): 2010-08-04 09:35:12
我用过这两组酶,NEB和Fermentas都还是不错的
3楼2010-08-03 13:36:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh7690703

木虫 (正式写手)

我使用的是Takara的酶,两组酶酶切总是不彻底,根本就筛选不到阳性克隆子
4楼2010-08-04 09:36:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 4/200 2026-09-01 06:06 by o3EMxHUAQDtS
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 5/250 2026-09-01 05:45 by o3EMxHUAQDtS
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 5/250 2026-09-01 05:43 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
信息提示
请填处理意见