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dengxuepeng

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于固定化酶的问题 已有1人参与

最近在做固定化酶,是用凝血酶酶切大肠杆菌表达的融合蛋白(带有凝血酶切点),奇怪的是:电泳时游离酶切的那个泳道没任何条带,固定化酶的酶切效果还不错,这是为什么?请哪位高手指点一下。不胜感激!
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
lstt09nk(金币+3):不错,欢迎常来生物版~~ 2010-07-29 09:48:46
dengxuepeng(金币+5):谢谢你的建议 2010-07-30 18:09:04
我认为你这个结果有点问题了:
1 游离酶没有条带,最大的可能是游离酶不活,或者活性太低。
2 固定化酶有条带?如果你反应是在水相,95%的情况你固定化过的酶会失去一定活性。但你的情况是固定化的酶反而有,这个比较奇怪的。而且你固定化后会产生一些例如steric hindrance&mass transfer resistance的因素,所以但游离酶没有结果,你说固定化有结果,我感到疑惑了......

有一种可能,游离酶的反应条件苛刻而你所用的条件不符合,例如pH值。一般固定化后,酶的耐受性增强,有可能适应更宽广的反应条件。不过这只是推测了.

建议你先弄活游离的酶,要不然当你投paper时,reviewer一定会concern你的结果的
2楼2010-07-28 22:20:00
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