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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教壳聚糖/戊二醛固定化酶 的问题,谢谢！
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一道

木虫 (正式写手)

[求助] 请教壳聚糖/戊二醛固定化酶 的问题,谢谢！已有2人参与

各位老师同学，大家好：
      我最近在做壳聚糖/戊二醛固定化酶的实验，将壳聚糖和戊二醛在pH7.5的缓冲液中反应后，壳聚糖颜色变得稍微有些黄色，将其多次冲洗后在pH7.5的缓冲液中与酶温育固定化，但温育后的产物酶活检测却没有酶活。请问在这方面经验的各位前辈，我的实验操作过程中存在什么问题，该怎么改进，谢谢！！！
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1楼2012-07-08 11:42:22
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IMB2009

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2012-07-08 20:06:28
一道: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-07-09 09:40:55
戊二醛的共价交联反应条件相对剧烈（与吸附，包埋等相比），你的酶如果不坚挺，交联后没有活性很正常。多冲洗几次，避免吸附的影响，你可以测下你的交联率。
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5楼2012-07-08 18:34:01
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bamage

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
一道: 金币+4, ★★★很有帮助, 谢谢您的回复，希望咱们多多交流哈 2012-07-08 17:13:27
壳聚糖不是用醋酸来溶解的吗，pH7.5 壳聚糖没溶解所以才显示黄色。而且戊二醛交联时在酶与壳聚糖固定化后的步骤吧，戊二醛交联后再与酶反应，会不会酶就很难吸附上去所以检测不到酶活。
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2楼2012-07-08 13:18:48
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一道

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bamage at 2012-07-08 13:18:48
壳聚糖不是用醋酸来溶解的吗，pH7.5 壳聚糖没溶解所以才显示黄色。而且戊二醛交联时在酶与壳聚糖固定化后的步骤吧，戊二醛交联后再与酶反应，会不会酶就很难吸附上去所以检测不到酶活。

非常感谢您的回复。我看文献中如您所说的用醋酸溶解的是用于制备壳聚糖小球时才用的。文献中介绍的都是先是壳聚糖和戊二醛先反应，然后再再与酶固定的，其原理是先用壳聚糖上的氨基与戊二醛中的一个醛基反应，然后用另一醛基与酶蛋白上的氨基反应。请问你做的时候使用的是“戊二醛交联发生在在酶与壳聚糖固定化后的步骤”吗，谢谢
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3楼2012-07-08 17:12:50
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一道

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bamage at 2012-07-08 13:18:48
壳聚糖不是用醋酸来溶解的吗，pH7.5 壳聚糖没溶解所以才显示黄色。而且戊二醛交联时在酶与壳聚糖固定化后的步骤吧，戊二醛交联后再与酶反应，会不会酶就很难吸附上去所以检测不到酶活。

非常感谢您的回复。我看文献中如您所说的用醋酸溶解的是用于制备壳聚糖小球时才用的。文献中介绍的都是先是壳聚糖和戊二醛先反应，然后再再与酶固定的，其原理是先用壳聚糖上的氨基与戊二醛中的一个醛基反应，然后用另一醛基与酶蛋白上的氨基反应。请问你做的时候使用的是“戊二醛交联发生在在酶与壳聚糖固定化后的步骤”吗，谢谢
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4楼2012-07-08 17:13:50
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bamage

木虫 (著名写手)
我是在做壳聚糖、明胶的酶膜，在酶膜形成后再与戊二醛交联的。可能与楼主的不一样，如有误导之处，还请见谅！
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6楼2012-07-09 08:43:34
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一道

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by IMB2009 at 2012-07-08 18:34:01
戊二醛的共价交联反应条件相对剧烈（与吸附，包埋等相比），你的酶如果不坚挺，交联后没有活性很正常。多冲洗几次，避免吸附的影响，你可以测下你的交联率。

好的，谢谢哈，我再调整一下戊二醛的浓度试试。。。
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7楼2012-07-09 09:40:48
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blican

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by bamage at 2012-07-09 08:43:34
我是在做壳聚糖、明胶的酶膜，在酶膜形成后再与戊二醛交联的。可能与楼主的不一样，如有误导之处，还请见谅！

求问同学：
关于固定化酶酶活的概念，我是做化工的不是很了解：

我固定化方法是，酶固定在壳聚糖微球上，我在测固定化酶的酶活时，最后需要除以固定化酶（包括载体和酶）的质量，还是就除以负载在载体上的酶的量。
还有如何得知负载在载体上的酶的量，PS。我做的是葡萄糖异构酶。
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8楼2014-03-18 07:44:10
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bamage

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by blican at 2014-03-18 00:44:10
求问同学：
关于固定化酶酶活的概念，我是做化工的不是很了解：

我固定化方法是，酶固定在壳聚糖微球上，我在测固定化酶的酶活时，最后需要除以固定化酶（包括载体和酶）的质量，还是就除以负载在载体上的酶的 ...

固定化酶的酶活一般以U/g计算，即需除以固定化酶的质量。计算出固定化酶活之后，负载在载体上的酶量就可以用固定化酶活乘以固定化酶的质量来计算。
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9楼2014-03-18 09:58:20
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赖穗0911

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by bamage at 2012-07-09 08:43:34
我是在做壳聚糖、明胶的酶膜，在酶膜形成后再与戊二醛交联的。可能与楼主的不一样，如有误导之处，还请见谅！

您好最近我也在做明胶与壳聚糖混合固定化酶，我现在一点头绪都没有，不知道做成什么样的形状，看到你做的酶模，很感兴趣，你能指教指教我吗
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求解答
10楼2014-05-27 11:25:27
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