24小时热门版块排行榜    

查看: 3495  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

一道

木虫 (正式写手)

[求助] 请教壳聚糖/戊二醛固定化酶 的问题,谢谢! 已有2人参与

各位老师同学,大家好:
      我最近在做壳聚糖/戊二醛固定化酶的实验,将壳聚糖和戊二醛在pH7.5的缓冲液中反应后,壳聚糖颜色变得稍微有些黄色,将其多次冲洗后在pH7.5的缓冲液中与酶温育固定化,但温育后的产物酶活检测却没有酶活。请问在这方面经验的各位前辈,我的实验操作过程中存在什么问题,该怎么改进,谢谢!!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

IMB2009

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2012-07-08 20:06:28
一道: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-07-09 09:40:55
戊二醛的共价交联反应条件相对剧烈(与吸附,包埋等相比),你的酶如果不坚挺,交联后没有活性很正常。多冲洗几次,避免吸附的影响,你可以测下你的交联率。
5楼2012-07-08 18:34:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

bamage

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
一道: 金币+4, ★★★很有帮助, 谢谢您的回复,希望咱们多多交流哈 2012-07-08 17:13:27
壳聚糖不是用醋酸来溶解的吗,pH7.5 壳聚糖没溶解所以才显示黄色。而且戊二醛交联时在酶与壳聚糖固定化后的步骤吧,戊二醛交联后再与酶反应,会不会酶就很难吸附上去所以检测不到酶活。
2楼2012-07-08 13:18:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一道

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bamage at 2012-07-08 13:18:48
壳聚糖不是用醋酸来溶解的吗,pH7.5 壳聚糖没溶解所以才显示黄色。而且戊二醛交联时在酶与壳聚糖固定化后的步骤吧,戊二醛交联后再与酶反应,会不会酶就很难吸附上去所以检测不到酶活。

非常感谢您的回复。我看文献中如您所说的用醋酸溶解的是用于制备壳聚糖小球时才用的。文献中介绍的都是先是壳聚糖和戊二醛先反应,然后再再与酶固定的,其原理是先用壳聚糖上的氨基与戊二醛中的一个醛基反应,然后用另一醛基与酶蛋白上的氨基反应。请问你做的时候使用的是“戊二醛交联发生在在酶与壳聚糖固定化后的步骤”吗,谢谢
3楼2012-07-08 17:12:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一道

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bamage at 2012-07-08 13:18:48
壳聚糖不是用醋酸来溶解的吗,pH7.5 壳聚糖没溶解所以才显示黄色。而且戊二醛交联时在酶与壳聚糖固定化后的步骤吧,戊二醛交联后再与酶反应,会不会酶就很难吸附上去所以检测不到酶活。

非常感谢您的回复。我看文献中如您所说的用醋酸溶解的是用于制备壳聚糖小球时才用的。文献中介绍的都是先是壳聚糖和戊二醛先反应,然后再再与酶固定的,其原理是先用壳聚糖上的氨基与戊二醛中的一个醛基反应,然后用另一醛基与酶蛋白上的氨基反应。请问你做的时候使用的是“戊二醛交联发生在在酶与壳聚糖固定化后的步骤”吗,谢谢
4楼2012-07-08 17:13:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 什么时候开奖? +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见