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dengxuepeng

金虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】关于固定化酶的问题已有1人参与

最近在做固定化酶，是用凝血酶酶切大肠杆菌表达的融合蛋白（带有凝血酶切点），奇怪的是：电泳时游离酶切的那个泳道没任何条带，固定化酶的酶切效果还不错，这是为什么？请哪位高手指点一下。不胜感激！

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在工作中享受生活。

1楼 2010-07-27 13:40:21

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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

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专业: 应用高分子化学与物理

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lstt09nk(金币+3):不错，欢迎常来生物版~~ 2010-07-29 09:48:46
dengxuepeng(金币+5):谢谢你的建议 2010-07-30 18:09:04

我认为你这个结果有点问题了：
1 游离酶没有条带，最大的可能是游离酶不活，或者活性太低。
2 固定化酶有条带？如果你反应是在水相，95%的情况你固定化过的酶会失去一定活性。但你的情况是固定化的酶反而有，这个比较奇怪的。而且你固定化后会产生一些例如steric hindrance&mass transfer resistance的因素，所以但游离酶没有结果，你说固定化有结果，我感到疑惑了......

有一种可能，游离酶的反应条件苛刻而你所用的条件不符合，例如pH值。一般固定化后，酶的耐受性增强，有可能适应更宽广的反应条件。不过这只是推测了.

建议你先弄活游离的酶，要不然当你投paper时，reviewer一定会concern你的结果的

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