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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酵母DNA进行pcr鉴定
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yanglinhui

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酵母DNA进行pcr鉴定 已有10人参与

酵母DNA进行pcr鉴定，第一次pcr有一条暗带，但没回收，第二次再p的时候就p不出来了，第三次还是p不出来。。。条件都没变，只是模板浓度比第一次大了，不知怎么回事，请大家给点意见哦
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1楼 2010-07-22 16:13:04
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★
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看天(金币+2):鼓励交流 2010-07-22 17:15:27
以基因组为模板PCR受模板影响较大，比如基因组提取的好坏，模板量的控制等等，我一般以基因组为模板做鉴定的时候，一律用TD-PCR，模板做梯度稀释，1/20,1/40,1/80,一般情况下都能成功。
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Thank-you，so-blue.
2楼2010-07-22 16:43:36
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steamsn

金虫 (小有名气)
★ ★
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amisking(金币+1):good! 2010-07-22 21:41:51
你拿你第一次的PCR产物稀释一下,做为模板在进行扩增,看看能扩增出来吗,如果扩增不出来就说明你的模板有问题.
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我命由我不由天
3楼2010-07-22 17:20:50
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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amisking(金币+2):欢迎分享经验。 2010-07-22 21:42:24
PCR这个东西很怪异，有的时候模板浓度大了也会不出带的，只有浓度在适宜范围才会扩增成功，所以你可以试着稀释一下模板，进行扩增。另外按3楼说用PCR产物稀释了P，试试
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4楼2010-07-22 21:23:15
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zal

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
模版浓度高未必是好事，合适的才是最重要的，还是需要做梯度稀释的，找到最佳模板的浓度。引物也是一个关键的因素！
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欲求其上，必先上上
5楼2010-07-23 00:16:18
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tongyanna

金虫 (正式写手)
我是新手，学习学习
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自己的路，自己快乐的走
6楼2010-07-23 11:01:43
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fykxy_206

木虫 (正式写手)
★ ★
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lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-07-25 09:17:29
你能确定第一次P出的是你要的目的条带吗?我也遇到过这种情况，结果是第一次不是我们想要的目的条带，而是非特异性的条带。换引物后才出现特异性条带。你可以换下引物试试
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7楼2010-07-23 15:46:12
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
PCR体系有没有出什么问题？考虑换一下体系，还有的上面的同志们都说得很清楚了……
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8楼2010-07-23 15:58:33
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lgslgwlgs

木虫 (小有名气)
PCR这东西很奇怪啊！
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9楼2010-07-23 19:50:42
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yanglinhui

铜虫 (小有名气)

感谢各位

非常感谢！谢谢你们了 我觉得你们说的很有道理 我照着去试试
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10楼2010-07-25 08:49:36
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