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[交流]
【求助/交流】蛋白质盐析及除盐 已有5人参与
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我是学化学的，对蛋白质不太了解，最近要做一些蛋白方面的实验，在此请教对蛋白质比较了解的人。 做对血红蛋白的改性，需要将血红蛋白盐析出来，血红蛋白等电点6.8左右，用硫酸铵盐析，需要调节调节硫酸铵的pH到多少为宜（老板说直接调节到等电点，老板也不咋懂，不知道在等电点会不会变性），盐析完成后脱盐，如果用超滤，超滤膜孔径需要多大的，离心机转速大概多少。如果用过柱子方式脱盐，需要什么型号的。 以上操作不使蛋白质变性。谢谢大家。 |
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lwiaanngg
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看天(金币+3):谢谢回答 2010-07-19 12:56:00
cheng492(金币+5): 2010-07-19 21:53:49
看天(金币+3):谢谢回答 2010-07-19 12:56:00
cheng492(金币+5): 2010-07-19 21:53:49
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蛋白的溶解一般不会直接在DI water中，毕竟有些蛋白在DI water的溶解度不算高。为了提高溶解度，蛋白有salt in这种现象，也就是说，随着盐浓度增加，蛋白溶解度增加。而且，你如果需要在某个pH下做实验，也需要buffer给予pH的保证。 我并不知道你做salt out的目的为何。具体怎么选择，需要看你的蛋白本身。NH4这种盐有一个问题是，他会和Glu-COO-形成氢键，有可能影响你的蛋白（Thomas C. Bruice_PNAS_2004_Mechanisms of ammonia activation and ammonium ion inhibition of quinoprotein methanol dehydrogenase_A computational approach）。 具体的一些情况，你需要用实验来摸索 |
4楼2010-07-19 10:54:58
lwiaanngg
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2楼2010-07-18 23:39:36
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