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闲花落地

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助:转化克隆后长出大片菌落? 已有5人参与

各位兄弟姐妹们:
兄弟最近在做克隆文库,针对环境样品扩增细菌16S基因,通过pMD19-T连接,转化到商品化的感受态细胞内。连接转化后吸取50ul涂在抗性平板上,培养16小时后出现满板的糊状菌苔,48小时后,可见很微小微小的菌落,非常奇怪?
后来我改涂10和20ul,培养16小时后,可见1个正常的菌落,其余全部为很微小微小的菌落?
请问有哪位同行遇到过类似情况,帮忙解决一下,小弟在此多谢了!
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
抗生素失效,污染?
路漫漫其修远兮,吾将上下而求索
2楼2010-07-11 18:41:03
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闲花落地

铜虫 (初入文坛)

谢谢楼上的兄弟,也有可能,买新的抗生素再做一次平板加入试试,因为我的抗生素配好放在-20度差不多一年了
3楼2010-07-11 20:08:29
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ymzfeng

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可能是抗生素失效了,也可能是涂板没涂好
4楼2010-07-11 23:28:18
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刘小乐

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可能是菌种浓度太高了吧?一下取出菌种液稀释一下在涂板看看效果,顺便结合抗生素效价是否失效考虑下
互动互利互相学习
5楼2010-07-12 12:45:25
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louli

铜虫 (小有名气)

我也做过类似的,其实菌长到8个小时就可以了,16个小时太长了,时间长假阳性的菌落会增多。如果你每次转化完之后,菌长的都很密的话,可以再划线分离单菌落。
6楼2010-07-18 09:45:18
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