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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助：转化克隆后长出大片菌落？
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闲花落地

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助：转化克隆后长出大片菌落？ 已有5人参与

各位兄弟姐妹们：
兄弟最近在做克隆文库，针对环境样品扩增细菌16S基因，通过pMD19-T连接，转化到商品化的感受态细胞内。连接转化后吸取50ul涂在抗性平板上，培养16小时后出现满板的糊状菌苔，48小时后，可见很微小微小的菌落，非常奇怪？
后来我改涂10和20ul,培养16小时后，可见1个正常的菌落，其余全部为很微小微小的菌落？
请问有哪位同行遇到过类似情况，帮忙解决一下，小弟在此多谢了！
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1楼 2010-07-11 17:19:06
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
抗生素失效，污染？
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
2楼2010-07-11 18:41:03
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闲花落地

铜虫 (初入文坛)
谢谢楼上的兄弟，也有可能，买新的抗生素再做一次平板加入试试，因为我的抗生素配好放在-20度差不多一年了
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3楼2010-07-11 20:08:29
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ymzfeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可能是抗生素失效了，也可能是涂板没涂好
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4楼2010-07-11 23:28:18
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刘小乐

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可能是菌种浓度太高了吧？一下取出菌种液稀释一下在涂板看看效果，顺便结合抗生素效价是否失效考虑下
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互动互利互相学习
5楼2010-07-12 12:45:25
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louli

铜虫 (小有名气)
我也做过类似的，其实菌长到8个小时就可以了，16个小时太长了，时间长假阳性的菌落会增多。如果你每次转化完之后，菌长的都很密的话，可以再划线分离单菌落。
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6楼2010-07-18 09:45:18
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