| 查看: 1277 | 回复: 4 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
vivihao金虫 (小有名气)
|
[交流]
【求助/交流】荧光双分子互补技术 已有2人参与
|
||
|
有没有哪个哥哥姐姐做过荧光双分子互补实验研究蛋白间的相互作用？小弟我现如今要做，不知道如何下手，首先构建载体方面的问题，如果我用GFP，譬如说N端部分GFP是到第几个氨基酸为止，C端部分GFP呢？ 看到有文献说N端GFP的第155或173个氨基酸位置后连着A蛋白核苷酸序列，余下的GFP蛋白的核苷酸序列连接B蛋白核苷酸序列。构建好了2个载体同时转染细胞，看有没有荧光。 请问大侠是不是这样弄的？帮小弟解惑吧 |
回复此楼» 猜你喜欢
材料化工调剂
已经有11人回复
-
高分子化学与物理调剂
已经有12人回复
-
0805总分292，求调剂
已经有5人回复
-
306分材料调剂
已经有5人回复
-
化工299分求调剂 一志愿985落榜
已经有5人回复
-
材料学硕318求调剂
已经有11人回复
-
0856化工专硕求调剂
已经有12人回复
-
265分求调剂不调专业和学校有行学上就
已经有7人回复
-
298求调剂
已经有6人回复
-
一志愿中南大学理学化学
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 最全的荧光定量PCR讲座，90多页，希望可以帮助大家
已经有547人回复
- 关于 荧光原位杂交技术（FISH） 求助
已经有6人回复
- 荧光定量PCR阴性对照P出了目的条带
已经有14人回复
- 荧光分子探针的问题
已经有9人回复
- 双分子荧光技术
已经有6人回复
- 关于荧光寿命光谱！
已经有9人回复
- 除了酵母双杂交技术 还有没有别的方法可以筛选互作蛋白的
已经有14人回复
- 求助：荧光寿命？
已经有4人回复
- 求助荧光分子淬灭时间
已经有4人回复
- [求助]有关DNA-cy5的荧光光谱问题
已经有5人回复
- 求助：酸度对荧光的影响
已经有3人回复
- 蛋白质之间相互作用的研究方法有哪些？
已经有3人回复
- 荧光定量PCR实验技术
已经有15人回复
- 定量PCR读取荧光值的步骤需要保持多长时间？
已经有12人回复
- 荧光pcr标准曲线问题
已经有21人回复
- 紫外可见、分子荧光、双光子荧光法的基本公式推导
已经有164人回复
- 请问有没有量子点或荧光染料分子的激发和发射波长在600多和700多nm的
已经有6人回复
- 【求助】PS 的荧光
已经有3人回复
- 【求助/交流】双荧光素酶报告系统出现几个问题，求解答，谢谢。
已经有4人回复
- 【求助/交流】请教关于双分子荧光互补技术
已经有4人回复
- 【求助】关于如何确定物质的荧光最大激发波长
已经有7人回复
mgangle
铁杆木虫 (著名写手)
乐乐家族-----乐颠颠
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 9313.9
- 散金: 200
- 沙发: 1
- 帖子: 2567
- 在线: 475.8小时
- 虫号: 512931
- 注册: 2008-02-27
- 专业: 植物病理学
★ ★ ★
看天(金币+3):如此的热心 2010-07-09 18:16:06
vivihao(金币+5):真的谢谢您了，那么热心让小弟很感动。这2篇文献我都看了，上面说到在构建载体的时候在N端GFP后还有加上一段几个氨基酸组成的linker,而有的文献上面没有介绍啊？不知道到底要不要加？我是做昆虫的，载体只能自己构建，买了不了啊，悲剧 2010-07-12 10:23:59
看天(金币+3):如此的热心 2010-07-09 18:16:06
vivihao(金币+5):真的谢谢您了，那么热心让小弟很感动。这2篇文献我都看了，上面说到在构建载体的时候在N端GFP后还有加上一段几个氨基酸组成的linker,而有的文献上面没有介绍啊？不知道到底要不要加？我是做昆虫的，载体只能自己构建，买了不了啊，悲剧 2010-07-12 10:23:59
|
你好！我帮你问了一下！他们的BiFC载体是从公司购买的，所以没有自己去构建，他们用的是YFP从155个氨基酸处插入，我也查了一部分文章，文章中指出 Geoffrey 等[4]研究发现，在GFP 的两个β片层之间的环结构上至少有10 个位点可以插入外源蛋白而不影响GFP 的荧光活性，但激发波长和发射波长会略有改变. 例在GFP 的第144 个和145 个氨基酸之间插入外源蛋白序列，用487 nm 波长的光波激发后，仍能产生波长为512 nm 的荧光. 附上文献，希望对你有用！ http://www.brsbox.com/filebox/do ... bb709669d685b9821b5 http://www.brsbox.com/filebox/do ... ecc8279a5e96268b0e0 |
4楼2010-07-09 17:27:20
mgangle
铁杆木虫 (著名写手)
乐乐家族-----乐颠颠
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 9313.9
- 散金: 200
- 沙发: 1
- 帖子: 2567
- 在线: 475.8小时
- 虫号: 512931
- 注册: 2008-02-27
- 专业: 植物病理学
2楼2010-07-09 14:29:58
mgangle
铁杆木虫 (著名写手)
乐乐家族-----乐颠颠
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 9313.9
- 散金: 200
- 沙发: 1
- 帖子: 2567
- 在线: 475.8小时
- 虫号: 512931
- 注册: 2008-02-27
- 专业: 植物病理学
vivihao(金币+3):首先谢谢您回帖，我觉得您理解的可能有些偏差，好像是一个载体是P-nGFP-A,另一个载体是P-cGFP-B,然后共转染细胞，如果出现荧光说明AB蛋白互作。我现在想知道是在GFP的那个位置断开融合AB蛋白序列？既然您实验室的人有做过的，还请帮我您了解下，不盛感激！ 2010-07-09 16:24:10
|
其实我也没有做过，只是实验室其他人干过，我是这样理解的 如果你要验证A，B蛋白是否互作，那么你要构建： nGFP+A，nGFP+B，cGFP+B，cGFP+A 然后去A，B载体两两组合。这样我们连接的A，B蛋白都可以位于nGFP，cGFP的C端，不用再去考虑A，B蛋白是否会由于位置不同而导致不互作！ 我是这么理解的仅供参考！呵呵！ |
3楼2010-07-09 15:34:22
5楼2015-04-28 20:43:55
10