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beiw

银虫 (初入文坛)

[求助] [求助]有关DNA-cy5的荧光光谱问题

在两种DNA上分别修饰了荧光基团cy5和cy3,分别测了二者的吸收谱发现在540nm以下DNA1-cy5就几乎没有吸收,而DNA2-cy3有最大吸收峰在540nm处,这与文献报道的相符。但是随后以cy3的最大吸收波长540nm为激发波长,测了cy5的荧光光谱,按理应该cy5没有较大发射峰(无吸收,无激发啊!),可是重复了很多次,均在541nm处有非常强的发射峰(与cy3的发射峰重合,强度相等)。
   请问这是什么原因???有木有虫友也遇到过这种情况,了解原因的?。。。。是否与cy5的什么结构异构有关?还是什么?有木有相关文献?
   曾怀疑比色皿没洗干净,但是换了个新的比色皿重测cy5(Ex:540nm)还是在541nm处测得最大发射峰。

[ Last edited by beiw on 2013-3-6 at 13:27 ]
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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beiw: 金币+1, 有帮助 2013-03-07 11:56:27
beiw: 金币+4 2013-03-07 12:48:33
测发射光谱不是应该比激发光红移的吗?用540nm激发的话,你观察到的541nm应该是激发光的tail吧。
2楼2013-03-07 10:56:45
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beiw

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-07 10:56:45
测发射光谱不是应该比激发光红移的吗?用540nm激发的话,你观察到的541nm应该是激发光的tail吧。

那如果541nm只是激发光的尾巴,我用540nm去激发cy3(547nm是其最大吸收峰),应该会扫出来红移后的其发射峰,但是扫后,500-700nm范围内只有一个强度很大的峰也在541nm处,这应该是发射峰不是激发峰的尾巴吧??
一生所爱-cc
3楼2013-03-07 11:56:09
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beiw

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-07 10:56:45
测发射光谱不是应该比激发光红移的吗?用540nm激发的话,你观察到的541nm应该是激发光的tail吧。

非常感谢提示,又扫了一遍,并且把图放大了,发现了红移的峰。是我样品浓度比较低的缘故吧。已经准备修改方案。非常感谢!
一生所爱-cc
4楼2013-03-07 12:48:29
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xiaohuilove7

木虫 (小有名气)

请问楼主是通过什么方法将Cy5修饰了DNA呢
5楼2016-11-11 09:07:07
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夕颜醉清风

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by xiaohuilove7 at 2016-11-11 09:07:07
请问楼主是通过什么方法将Cy5修饰了DNA呢

生工买啊
6楼2019-02-18 21:40:35
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