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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » [求助]有关DNA-cy5的荧光光谱问题
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beiw

银虫 (初入文坛)

[求助] [求助]有关DNA-cy5的荧光光谱问题

在两种DNA上分别修饰了荧光基团cy5和cy3，分别测了二者的吸收谱发现在540nm以下DNA1-cy5就几乎没有吸收，而DNA2-cy3有最大吸收峰在540nm处，这与文献报道的相符。但是随后以cy3的最大吸收波长540nm为激发波长，测了cy5的荧光光谱，按理应该cy5没有较大发射峰（无吸收，无激发啊！），可是重复了很多次，均在541nm处有非常强的发射峰（与cy3的发射峰重合，强度相等）。
   请问这是什么原因？？？有木有虫友也遇到过这种情况，了解原因的？。。。。是否与cy5的什么结构异构有关？还是什么？有木有相关文献？
   曾怀疑比色皿没洗干净，但是换了个新的比色皿重测cy5（Ex：540nm）还是在541nm处测得最大发射峰。

[ Last edited by beiw on 2013-3-6 at 13:27 ]
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一生所爱-cc
1楼 2013-03-06 13:26:06
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beiw

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-07 10:56:45
测发射光谱不是应该比激发光红移的吗？用540nm激发的话，你观察到的541nm应该是激发光的tail吧。

非常感谢提示，又扫了一遍，并且把图放大了，发现了红移的峰。是我样品浓度比较低的缘故吧。已经准备修改方案。非常感谢！
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一生所爱-cc
4楼2013-03-07 12:48:29
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
beiw: 金币+1, ★有帮助 2013-03-07 11:56:27
beiw: 金币+4 2013-03-07 12:48:33
测发射光谱不是应该比激发光红移的吗？用540nm激发的话，你观察到的541nm应该是激发光的tail吧。
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2楼2013-03-07 10:56:45
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beiw

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-07 10:56:45
测发射光谱不是应该比激发光红移的吗？用540nm激发的话，你观察到的541nm应该是激发光的tail吧。

那如果541nm只是激发光的尾巴，我用540nm去激发cy3（547nm是其最大吸收峰），应该会扫出来红移后的其发射峰，但是扫后，500-700nm范围内只有一个强度很大的峰也在541nm处，这应该是发射峰不是激发峰的尾巴吧？？
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一生所爱-cc
3楼2013-03-07 11:56:09
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xiaohuilove7

木虫 (小有名气)
请问楼主是通过什么方法将Cy5修饰了DNA呢
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5楼2016-11-11 09:07:07
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