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ben1147

木虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 18 (小学生)
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虫号: 709538
注册: 2009-02-26
专业: 微生物生理与生物化学

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！相比反转录本身，RNA更可能出问题！ 2011-11-23 17:51:51

引用回帖:

11楼: Originally posted by 纳兰欣光 at 2011-11-22 15:00:46:
还是想问一下P全长引物的设计都有什么要求，从起始密码子开始到终止密码子结束吗？比如说上有引物从ATG开始数20几个碱基？最近验证全长，P不出来，用的是TAKARA的M-MLV反转录酶，基因全长2300bp,想问一下是不是反 ...

2.3k不算长，引物也没什么要特别注意的。P不出来是不是RNA质量不好？一般问题出在反转本身很少见，尤其在5‘降解比较厉害的时候

至于P多长，当然是越长越好了，至少要包括ORF，毕竟全长片段拿到了，以后要做克隆什么的也有用。不一定非要卡着ATG，往上游走也可以，给引物设计留的余地大一点，多搞几对，没准哪对就能出来