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纳兰欣光

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
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10楼: Originally posted by ben1147 at 2011-11-22 13:20:20:
当然要验证啦,拼起来的片段也许是来自两个同源基因或者等位基因的片段
直接P全长就能验证了么

还是想问一下P全长引物的设计都有什么要求,从起始密码子开始到终止密码子结束吗?比如说上有引物从ATG开始数20几个碱基?最近验证全长,P不出来,用的是TAKARA的M-MLV反转录酶,基因全长2300bp,想问一下是不是反转录酶的问题呢?
11楼2011-11-22 15:00:46
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good!相比反转录本身,RNA更可能出问题! 2011-11-23 17:51:51
引用回帖:
11楼: Originally posted by 纳兰欣光 at 2011-11-22 15:00:46:
还是想问一下P全长引物的设计都有什么要求,从起始密码子开始到终止密码子结束吗?比如说上有引物从ATG开始数20几个碱基?最近验证全长,P不出来,用的是TAKARA的M-MLV反转录酶,基因全长2300bp,想问一下是不是反 ...

2.3k不算长,引物也没什么要特别注意的。P不出来是不是RNA质量不好?一般问题出在反转本身很少见,尤其在5‘降解比较厉害的时候

至于P多长,当然是越长越好了,至少要包括ORF,毕竟全长片段拿到了,以后要做克隆什么的也有用。不一定非要卡着ATG,往上游走也可以,给引物设计留的余地大一点,多搞几对,没准哪对就能出来

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12楼2011-11-22 18:11:54
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纳兰欣光

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by ben1147 at 2011-11-22 18:11:54:
2.3k不算长,引物也没什么要特别注意的。P不出来是不是RNA质量不好?一般问题出在反转本身很少见,尤其在5‘降解比较厉害的时候

至于P多长,当然是越长越好了,至少要包括ORF,毕竟全长片段拿到了,以后要做克 ...

谢谢了。。。
13楼2011-11-23 10:14:52
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淘气笨笨21

新虫 (初入文坛)

学习了
14楼2012-08-14 09:43:51
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nieqin138220

木虫 (小有名气)

看过 学习了 谢谢
不抛弃理想,不放弃努力
15楼2012-08-15 10:54:40
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