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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】溶菌酶处理效果很差
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zzup

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】溶菌酶处理效果很差 已有7人参与

最近提取摩氏摩根菌(阴性，大肠的变种）的基因组DNA,用溶菌酶处理37℃2小时了溶液还是很浑浊，效果很不好，菌量不大酶加的也够。后来加10%SDS和蛋白酶，加了SDS也不变清、也不浑浊，求教是怎么回事，有没有什么其他更好的裂解细胞的方法呢？
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1楼 2010-06-23 13:25:20
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
zzup(金币+1): 2010-06-23 16:46:50
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-06-24 15:02:54
反复冻融法~~
不过看你的DNA下游要做什么实验咯~~如果要求太高，还是温和点好~~
蛋白酶K在含SDS的条件下似乎是5x度活性才最高
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2楼2010-06-23 14:37:25
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zzup

金虫 (初入文坛)
要求染色体的质量要比较好，反复冻融貌似不太合适
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3楼2010-06-23 16:47:35
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
zzup(金币+1): 2010-06-24 08:50:40
酶消化的过程中最好摇动
其实有时候很浑浊液不怕，照样可以提出来
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4楼2010-06-23 17:59:17
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xieweitian

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-06-24 15:03:08
我觉得还是超声波破碎法效果比较好。不过，在破碎时，最好加玻璃破碎珠，这样效果很好。
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520-1314
5楼2010-06-24 13:38:58
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-24 17:58:14
楼上……超声会把基因组整得很惨……提蛋白就好，提核酸可千万不要
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6楼2010-06-24 17:35:11
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lmzxcom1

金虫 (著名写手)
话说你的溶菌酶是不是有点问题，另外，溶菌酶需要一个合适的反应体系
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7楼2010-06-24 19:46:54
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buster

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
或许可以试一下蜗牛酶和变溶菌素
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8楼2010-06-24 21:24:19
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yybbzzm

木虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
加EDTA
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9楼2010-06-24 21:52:54
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CYPfree

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主，想问一下摩氏摩根用什么方法分离？什么培养基来筛选？
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10楼2017-05-10 09:13:39
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