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bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick

[交流] 【求助/交流】关于平末端连接 已有12人参与

最近做定向克隆,用的两个酶,一个是XbaI ,另一个是SmaI,第二个是平端的。做连接的时候摩尔比例都没有问题,50%的PEG4000也加过了,但是总是连接失败。
在这之前我有做过凸出端补平,再进行平末端连接的实验,感觉挺容易连接的,不知道为什么现在就总是失败。
请大家帮忙一下,分享一下做平端连接的经验,或者帮我分析一下什么地方可能出现问题,谢谢啦~~
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我们都是芸芸众生的小人物,相遇相知,都是幸福!
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-06-24 17:30:24:
去磷酸化吧

why?
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
22楼2011-04-08 13:47:38
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+2): good 2011-04-08 18:07:16
换别的TAKARA或者NEB的酶,即使不换也要用管新的酶来切,还有把连接酶和buffer全换新开封的试试
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
23楼2011-04-08 13:50:47
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