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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教各位一个定量PCR引物设计的问题，谢谢啦
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felis

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请教各位一个定量PCR引物设计的问题，谢谢啦已有3人参与

我想通过定量PCR分析几个基因表达的差异，请问我应该根据mRNA序列设计引物还是cDNA序列呢？我感觉应该是cDNA。如果以mRNA序列设计，有什么区别呢？问题比较初级，请不吝赐教，谢谢哈
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1楼2010-06-21 17:58:44
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ymzfeng

金虫 (小有名气)
★
felis(金币+1):谢谢参与
做定量PCR检测一般比较灵敏的
所检测基因长度不用很大吧
在CDS区域设计比较好些吧
mRNA中有内含子，cDNA中有非编码序列的
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4楼2010-06-21 20:18:14
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★
felis(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-06-21 18:52:03
有什么区别呢？
现在所谓的gDNA、cDNA、mRNA序列不都指的编码链么？


两条引物各能与一条链结合并引发合成，即使mRNA和cDNA序列是互补的，第一个循环结束后都会形成双链DNA，之后的循环就是正常的PCR一变二，二变四的过程了

不用操心正义反义链的问题

[ Last edited by ben1147 on 2010-6-21 at 18:51 ]
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2楼2010-06-21 18:41:50
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felis

木虫 (正式写手)
补充一下，实验中所用模板是RNA反转后的cDNA
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3楼2010-06-21 18:46:45
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