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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】怎样减少引物二聚体
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飘在海上的雪

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】怎样减少引物二聚体 已有6人参与

初做PCR试验，总得到引物二聚体，怎样才能解决这个问题呢？
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不在沉默中爆发，就在沉默着死亡！
1楼 2010-05-31 20:01:42
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-05-31 20:37:14
设计引物的问题 设计时注意点
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海纳百川止于至善
2楼2010-05-31 20:05:25
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jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引物tm值设的高些，pcr的时候退货温度提高
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3楼2010-05-31 21:06:04
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-06-01 07:47:17
从开始设计引物时就注意△G不要太大，即使引物间有互补也避免在3'端

引物终浓度可以低一点，普通PCR 0.2 uM就够了

dimer其实也是个相对的事情，只要产物足够多，有dimer也无所谓
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4楼2010-05-31 21:24:04
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
scelab(金币+2):high hand~ :tiger23: 2010-06-01 07:47:37
如果做克隆，dimer无所谓啦，反正都切胶
如果做RT之类的，那么就在设计引物的时候好好看dimer的评价了~~自由能降不要太大，一般不过8。然后适当提高一点退火温度
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5楼2010-05-31 23:18:47
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WEICHAOYING

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+5):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-06-01 07:47:54
1.引物设计问题，应该看看引物设计的原则，在DNAMAN上比对一下你的引物质量
2.加样时引物不要太多
3.优化PCR条件
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6楼2010-05-31 23:29:11
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genetics183

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
避免引物之间的序列互补，尤其是3‘端要避免。
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士虽有学，而行为本焉。
7楼2010-06-19 20:36:01
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