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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 【求助/交流】毕赤酵母电转化问题
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crab1983

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】毕赤酵母电转化问题 已有4人参与

大家好，我现在在做毕赤酵母的转化，我想请教大家，我用的是电转化的方法，转化之后筛选没有筛选出来，我想可能是没转进去，我现在不知道该这么办了，请做过的朋友帮帮忙！我用毕赤酵母菌株是GS115，表达载体是pPIC9K。
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1楼 2010-05-28 15:10:23
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jasco

木虫 (正式写手)
★
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-29 09:32:46
首先确定是不是转进去了，对电转化不确定的话，可以用化转试试看
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2楼2010-05-28 15:36:07
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crab1983

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-05-28 15:36:07:
首先确定是不是转进去了，对电转化不确定的话，可以用化转试试看

您能说说具体是怎么做吗
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3楼2010-05-28 17:03:46
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austin2008

铁杆木虫 (著名写手)
化转就是LiCl转化啊，毕赤酵母表达手册上有啊
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优秀是一种习惯;生命是一种过程;放弃是一种智慧;缺点是一种恩惠!
4楼2010-05-29 18:11:26
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xing1789

铜虫 (初入文坛)
一：检测你的质粒是不是完全线性。
二：检测你的线性是不是达到标准的微克级别。
三：检测你的线性溶液是不是盐浓度过高。
四：电击之后是不是迅速加入缓冲溶液。
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475502411
5楼2010-05-29 20:21:07
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475502411

铜虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
引用回帖:
189252楼: Originally posted by xing1789 at 2010-05-29 20:21:07
一：检测你的质粒是不是完全线性。
二：检测你的线性是不是达到标准的微克级别。
三：检测你的线性溶液是不是盐浓度过高。
四：电击之后是不是迅速加入缓冲溶液。

您好，我想请教一下，线性化后直接电泳回收行吗？用不用再去磷酸化啊？
还有怎么检测是不是盐的浓度过高啊？
谢谢
新手敬请指教
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
6楼2012-09-18 15:25:03
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