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炎黄逍遥

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】蛋白电泳BUFFER问题 已有3人参与

配置方法我是知道的,
组份浓度:
  250mM Tris-HCl(pH6.8)
  10%(W/V) SDS
  0.5%(W/V) BPB
  50%(V/V) 甘油
  5%(W/V) β-巯基乙醇
配制量:        5mL
配制方法:
1.量取下列试剂,置于10mL塑料离心管中。
  1M Tris-HCl  1.25mL
  SDS  0.5g
  BPB  25mg
  甘油  2.5mL
2.加入去离子水溶解后定容至5mL。
3.小份(500μl/份)分装后,于室温保存。
4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。
5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右

但是总是配不好,甘油溶的特别慢,而且一加进去变色以后,看不清里边溶的程度,结果过一天后再看发现溴酚蓝跟本没有完全溶进去
不知哪位高手能帮帮忙。告诉我个有效的顺序,先加什么,再加什么,有什么注意事项或是窍门能够比较完美的配置Buffer
小弟这里感激不尽·`~
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我是虫子
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
60度加热,摇,甘油最后加
另外我建议你用DDT,巯基乙醇比较毒
3楼2010-05-27 16:08:09
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
友情帮你顶一下~
2楼2010-05-27 15:40:12
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cheo163

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2):很好的意见 2010-05-27 17:50:13
不要把sds和甘油一起加进去,不然两三天也有的搞~~
一定要先把sds完全溶了以后再加甘油
溶的时候可以适当加热以加速溶解,但是加热过头会烧糊掉!
4楼2010-05-27 17:07:34
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