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snowice

银虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】有关分子克隆发生突变的疑惑已有6人参与

我在做克隆时挑了几个建好的阳性单克隆送去测序，结果每种的目的片段都有4-6个位点发生突变，而且每种突变的位点还不一样，想问一下是pcr的时候就产生了一系列有不同突变位点的目的片段还是在下面的几步中发生了突变，最可能是那种情况呢，我的目的片段1000多点，用的promega的taq。真后悔没用KOD plus。。。

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爱吃爱睡懒得要死的猪头

1楼 2010-05-21 22:07:52

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-22 14:32:02

引用回帖:

Originally posted by snowice at 2010-05-21 22:34:46:
30个循环，就是感觉突变率太高了，那基本上就是在pcr的时候产生的突变了吗，主要是突变位点还不一样，不知道是不是在细菌中突变了？
另外用pfu在1000多点很少出现突变吧，kod 用着感觉太烧钱

KOD其实也不是很贵的~~不知道你买的是哪个牌子的KOD，TOYOBO的我用过，还行，虽然扩增能力远不如Invitrogen的白金Taq保真版，后者的保真度低一点，只有6X，但1000bp还是没问题的~~
pfu个人不大喜欢用……